Colonización micorrícica de raíces por tinción y conteo de intersecciones

Fundamento

Las raíces finas se aclaran con hidróxido de potasio en caliente, que vacía las células vegetales de contenido, y se tiñen con azul de tripano o con tinta y vinagre, que colorean las estructuras fúngicas. Las raíces teñidas se montan en portaobjetos o se distribuyen en una placa cuadriculada y se cuenta, en cada intersección con la grilla, si hay o no hifas, arbúsculos o vesículas. El porcentaje de intersecciones positivas es la colonización.

Matriz (en qué muestra)

Raíces de cultivos y de plantas nativas

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Microscopio óptico o estéreomicroscopio; baño termostático; placas cuadriculadas; campana de gases.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Hidróxido de potasio al 10%; ácido clorhídrico; azul de tripano o tinta azul con vinagre; glicerol; agua oxigenada para raíces pigmentadas.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Portaobjetos y cubreobjetos; tamices finos; pinzas; cápsulas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Colorantes; portaobjetos.

Unidad

% de colonización · % de arbúsculos · % de vesículas · densidad de esporas por gramo de suelo

Rango de referencia

En cultivos extensivos bajo buen manejo la colonización va del 30 al 60%; el laboreo intensivo y las dosis altas de fósforo la reducen

Norma que lo exige

Resoluciones del SENASA sobre registro de bioinsumos y de inoculantes micorrícicos; Ley 22.428 de fomento a la conservación de los suelos y regímenes provinciales de conservación y de buenas prácticas agrícolasnorma argentina

Norma que describe la técnica

Método de Phillips y Hayman para tinción; método de la grilla de Giovannetti y Mosse; manual del INVAMnorma argentina

Edición y vigencia de la norma

Método de Phillips y Hayman (1970), referencia de uso

Volumen de muestra

Raíces finas de 5 a 10 plantas por tratamiento, más 200 g de suelo rizosférico si se van a contar esporas

Conservación y transporte

Se muestrean las raíces finas y no las gruesas, que casi no se colonizan, y se toman con el suelo alrededor para no arrancarlas. Se lavan suavemente sobre tamiz y se conservan en alcohol al 50% o en FAA; si se secan, las estructuras se colapsan y la tinción no las muestra. No se congelan. El azul de tripano es tóxico y va en campana; la tinta con vinagre es una alternativa que funciona bien y no lo es.

Límite de detección típico

1% de colonización con 100 intersecciones contadas

Incertidumbre típica

±10%; se cuentan al menos 100 intersecciones por muestra para que el porcentaje sea estable

Área

Suelos y sustratos; Microbiología; Agronomía

Fecha de última actualización: 8/9/2026