Histología vegetal: fijación, inclusión, corte y coloración diferencial

Fundamento

La anatomía interna de un vegetal es uno de los caracteres más estables para identificarlo y una de las mejores formas de ver qué le pasó, pero exige una preparación que conserve los tejidos como estaban y los haga suficientemente delgados y contrastados para el microscopio. La secuencia clásica tiene cuatro pasos encadenados y cada uno puede arruinar al siguiente. La fijación detiene la degradación y estabiliza las estructuras: se usan mezclas como FAA —formol, ácido acético y alcohol— o glutaraldehído para trabajos finos, y el volumen de fijador debe superar varias veces al de la muestra. La deshidratación reemplaza el agua por alcohol en una serie creciente, lentamente, porque un salto brusco colapsa las células; después el alcohol se sustituye por un medio intermedio y finalmente por parafina o por una resina, que da al tejido la dureza necesaria para cortarlo. El corte se hace con micrótomo, entre cinco y veinte micrómetros según el tejido, o a mano alzada con hoja de afeitar en trabajos rápidos de identificación. La coloración es lo que separa unos tejidos de otros: la doble tinción de safranina y fast green tiñe de rojo las paredes lignificadas —xilema, esclerénquima— y de verde las celulósicas; el azul de toluidina da metacromasia y diferencia paredes según su composición; el floroglucinol clorhídrico revela lignina y el Sudán, las cutinas y suberinas. Para drogas vegetales fragmentadas se prefiere en cambio la disociación, que separa los elementos sin cortarlos y permite reconocer tricomas, cristales y esclereidas, que son los caracteres diagnósticos.

Analito (qué se busca)

Tejidos y estructuras anatómicas vegetales

Matriz (en qué muestra)

Hojas, tallos, raíces, cortezas, semillas y frutos de material fresco, herborizado o fijado; drogas vegetales en control de identidad; material de estudios anatómicos y de diagnóstico de daño

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Micrótomo de rotación o de deslizamiento con su afilador; estufa de inclusión con control de temperatura; dispensador de parafina; baño de flotación de cortes; microscopio óptico con cámara; campana de extracción para los fijadores y los solventes; platina calefactora.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Fijadores: FAA, glutaraldehído o formol tamponado; serie de alcoholes; xilol o sustituto; parafina histológica o resina de inclusión; safranina y fast green; azul de toluidina; floroglucinol y ácido clorhídrico; Sudán III o IV; medio de montaje; portaobjetos y cubreobjetos.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Material vegetal fresco, herborizado o fijado, con su identificación taxonómica y la parte de la planta registrada; moldes de inclusión; planilla con el protocolo de fijación, el espesor de corte y la coloración empleada; preparados permanentes rotulados y archivados.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Reactivos; parafina; hojas de micrótomo; portaobjetos y cubreobjetos.

Unidad

Ninguna · descripción de los tejidos observados y de los caracteres diagnósticos · espesor de corte empleado · coloración y reacción histoquímica de cada estructura · fotomicrografías con escala · comparación contra material de referencia identificado

Rango de referencia

Una deshidratación apurada colapsa las células y el corte muestra artefactos que se confunden con caracteres anatómicos: el daño se ve en la preparación y ya no se puede distinguir de lo que tenía la planta

Norma que lo exige

Los requisitos de identidad de drogas vegetales de las farmacopeas, que incluyen el examen microscópico; los protocolos de identificación taxonómica de los herbarios; los estudios de anatomía comparada y de diagnóstico fitopatológico

Norma que describe la técnica

Los manuales de microtécnica vegetal; los capítulos de examen microscópico de drogas vegetales de la farmacopea vigente; los procedimientos del laboratorio

Edición y vigencia de la norma

Manuales de microtécnica vegetal y capítulo de examen microscópico de la farmacopea vigente, según corresponda al uso

Volumen de muestra

Fragmentos de 5 a 10 mm de la parte de interés; varias repeticiones por individuo

Conservación y transporte

El material se fija dentro de las primeras horas y con volumen de fijador varias veces mayor al de la muestra: un tejido que se marchita antes de fijarse ya no recupera su estructura. El material fijado se conserva en alcohol al setenta por ciento; los preparados permanentes se archivan en posición horizontal y protegidos de la luz.

Límite de detección típico

Se resuelven estructuras del orden del micrómetro con el objetivo de inmersión

Incertidumbre típica

No corresponde: el resultado es descriptivo, y su confiabilidad depende del material de referencia con el que se compara

Área

Agronomía; Farmacéutico

Fecha de última actualización: 23/9/2026