Viroide de la exocortis de los cítricos (CEVd) en material de propagación por sPAGE e hibridación molecular

Fundamento

Un viroide es lo más simple que puede causar una enfermedad: una molécula circular de ARN de unos cientos de bases, sin cápside ni proteína propia, que se replica usando la maquinaria de la planta. Por no tener proteínas no hay nada que un anticuerpo pueda reconocer, y por eso la serología —que resuelve tristeza, cancrosis y clorosis variegada— acá no sirve y hay que ir directamente al ácido nucleico. La exocortis produce descascaramiento vertical de la corteza del pie, enanismo y pérdida de rendimiento, con una expresión que depende fuertemente del pie usado: sobre trifolio y citrange es severa, sobre otros pies puede pasar inadvertida durante años, lo que vuelve indispensable el análisis en la planta madre. Las normas del programa de certificación fijan dos caminos. La electroforesis secuencial en gel de poliacrilamida, sPAGE, separa los ácidos nucleicos de la muestra y aprovecha que el viroide es circular y muy estructurado: una segunda corrida en condiciones desnaturalizantes lo hace migrar de manera anómala y lo separa del ARN de la planta, donde se revela como una banda. La hibridación molecular usa una sonda complementaria marcada que se une sólo al viroide y se detecta sobre membrana, con mejor sensibilidad y capacidad de procesar más muestras.

Analito (qué se busca)

Viroide de la exocortis de los cítricos

Matriz (en qué muestra)

Material de propagación cítrico bajo certificación: plantas madre originales y de reserva, material de fundación, plantas yemeras y plantas certificadas de vivero

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Equipo de electroforesis vertical en poliacrilamida con fuente de poder; transiluminador; equipo de transferencia e hibridación sobre membrana con horno o baño termostatizado; centrífuga; homogeneizador de tejido.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Acrilamida y reactivos de gel; tampones de extracción de ácidos nucleicos; colorante de revelado del gel; sonda marcada complementaria al viroide y reactivos de hibridación y revelado; controles positivo y negativo de referencia.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Geles y cubetas; membranas de hibridación; micropipetas; planilla con la planta de origen y el pie sobre el que está injertada.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Reactivos de gel; membranas; sondas; puntas.

Unidad

Ninguna · detectable o no detectable · presencia o ausencia de la banda característica en el gel · señal de hibridación sobre el control

Rango de referencia

La expresión de la enfermedad depende del pie: sobre trifolio y citrange es severa y sobre otros pies puede no verse durante años, de modo que la ausencia de síntomas en la planta madre no significa nada. Ojo: la serología no detecta viroides, porque no tienen proteína; cualquier resultado de ELISA es ajeno a esta determinación. El análisis sólo vale si lo hace un laboratorio habilitado por el INASE: la habilitación técnica está reglada por la Resolución INASE 201/2022, y el laboratorio tiene que estar inscripto en el Registro Nacional de Comercio y Fiscalización de Semillas

Norma que lo exige

El Programa Nacional de Certificación de Cítricos, cuyas normas de funcionamiento de los laboratorios de diagnóstico aprobó la Resolución SAGPyA 98/2003; la Ley 20.247 de Semillas y Creaciones Fitogenéticas y su Decreto reglamentario 2.183/91, que hacen obligatoria la certificación del material cítrico

Norma que describe la técnica

La Resolución SAGPyA 98/2003, que fija para exocortis la electroforesis secuencial en gel de poliacrilamida y la hibridación molecular; los procedimientos del laboratorio habilitado

Edición y vigencia de la norma

Resolución SAGPyA 98/2003 vigente; procedimientos vigentes del laboratorio habilitado

Volumen de muestra

Corteza y brotes jóvenes de varios puntos de la planta, según el procedimiento del laboratorio

Conservación y transporte

Las muestras de brotes y hojas se toman con tijera desinfectada entre planta y planta, se identifican con la planta de origen y viajan refrigeradas de 4 a 8 grados, en bolsa cerrada y sin que se deshidraten. El cítrico distribuye los patógenos de manera despareja dentro del árbol, así que la toma se hace de varios puntos de la copa y no de una sola rama: una muestra de un solo brote puede dar negativo en una planta infectada. Para la extracción de ácidos nucleicos la muestra se procesa cuanto antes o se congela, y se trabaja con material libre de ribonucleasas.

Límite de detección típico

La hibridación molecular con sonda marcada detecta cargas menores que el sPAGE

Incertidumbre típica

Resultado cualitativo. El rendimiento de la extracción de ácidos nucleicos es la fuente principal de falsos negativos

Área

Agronomía; Biología molecular

Fecha de última actualización: 4/10/2026

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