Virus de la sharka (Plum pox virus) en frutales de carozo por DAS-ELISA con confirmación por RT-PCR en tiempo real

Fundamento

El virus de la sharka, Plum pox virus, produce en la fruta anillos y manchas cloróticas deprimidas que la vuelven invendible, con caída prematura en los casos severos; en Argentina se detectó la raza D, que afecta a duraznero, ciruelo, damasco y algunas ornamentales del género Prunus. Se transmite por áfidos de manera no persistente —el insecto lo adquiere y lo inocula en picadas de prueba de pocos segundos, lo que hace que el control químico del vector sea poco efectivo— y, sobre todo para lo que importa en el vivero, por el material de propagación: una yema infectada produce una planta infectada de por vida. De ahí que el control se concentre en el vivero y en la erradicación de focos, y que la vigilancia sea anual sobre los viveros inscriptos. El diagnóstico de rutina es serológico: DAS-ELISA con anticuerpos específicos sobre extracto de hoja, que es un tamizaje robusto y barato por muestra. Las muestras positivas o dudosas por ELISA se confirman por RT-PCR en tiempo real, que amplifica un fragmento del genoma viral a partir del ARN extraído y aporta la especificidad necesaria antes de una medida tan costosa como erradicar un lote. La distribución del virus en el árbol es irregular, así que el muestreo recorre varias ramas y orientaciones.

Analito (qué se busca)

Virus de la sharka

Matriz (en qué muestra)

Plantas de vivero y plantas madre de frutales de carozo del género Prunus: duraznero, ciruelo, damasco y ornamentales del mismo género, en viveros inscriptos

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Lector de microplacas y lavador para el ELISA; termociclador de tiempo real y equipo de extracción de ácidos nucleicos para la confirmación; centrífuga; homogeneizador de tejido; heladera y freezer.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Equipo DAS-ELISA para Plum pox virus; reactivos de extracción de ARN, retrotranscripción y amplificación con sondas específicas; controles positivo y negativo; tampones de extracción, lavado y sustrato.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Microplacas y tiras de PCR; micropipetas; bolsas de extracción; planilla con la identificación de la planta, la especie, la orientación de las ramas muestreadas y la fecha.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Placas y tiras; puntas con filtro; reactivos y controles.

Unidad

Ninguna · detectable o no detectable respecto del valor de corte · ciclo umbral en la RT-PCR de confirmación

Rango de referencia

Un ELISA positivo o dudoso no se informa como tal: se confirma por RT-PCR en tiempo real antes de cualquier medida, porque la consecuencia de un positivo es la erradicación del material. Ojo: el virus se distribuye de manera irregular dentro del árbol y su concentración varía con la época, de modo que un negativo sobre pocas ramas no descarta la infección; el muestreo recorre varias ramas y orientaciones. Esta vigilancia la conduce el SENASA; no forma parte de la certificación del INASE

Norma que lo exige

El control anual en viveros inscriptos de plantas que establece la Resolución SENASA 24/2005; el Programa Nacional de Sharka del SENASA, que fija la vigilancia y las medidas ante la detección de un foco. El vivero debe además estar inscripto en el Registro Nacional Fitosanitario de Operadores de Material de Propagación del SENASA y, para el material certificado, cumplir lo que exige el INASE según la Ley 20.247norma argentina

Norma que describe la técnica

Los protocolos de diagnóstico del SENASA y de los laboratorios de la red oficial, que fijan el DAS-ELISA como tamizaje y la RT-PCR en tiempo real como confirmación; los insertos de los equipos serológicos en usonorma argentina

Edición y vigencia de la norma

Resolución SENASA 24/2005 vigente; protocolos de diagnóstico vigentes de la red oficial

Volumen de muestra

Hojas de varias ramas y orientaciones por planta, según el protocolo de muestreo oficial

Conservación y transporte

Las hojas viajan refrigeradas de 4 a 8 grados, en bolsa cerrada y sin deshidratarse, identificadas por planta, y se procesan dentro de las 48 a 72 horas. Para la confirmación molecular el tejido se congela si la corrida se demora y se trabaja con material libre de ribonucleasas.

Límite de detección típico

La RT-PCR en tiempo real detecta cargas bastante menores que el DAS-ELISA, que es la razón por la que se reserva para la confirmación

Incertidumbre típica

El tamizaje es cualitativo contra el valor de corte; la variabilidad dominante es la del muestreo dentro del árbol y la época

Área

Agronomía; Biología molecular

Fecha de última actualización: 4/10/2026

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