Virus de la tristeza de los cítricos (CTV) en material de propagación por DAS-ELISA e inmunoimpresión

Fundamento

El virus de la tristeza es un closterovirus que se transmite por áfidos y, sobre todo, por el injerto: una yema infectada produce una planta infectada y cada planta vendida se lleva el problema a una quinta nueva. Sobre ciertas combinaciones de injerto y pie, en particular las que usan naranjo agrio, el virus mata la planta al degenerar el floema en la zona de unión; sobre otras combinaciones convive sin síntomas, y ahí está el peligro para el vivero, porque la planta madre puede estar infectada y verse sana. La detección de rutina es serológica. En el formato DAS-ELISA se tapiza el pocillo con un anticuerpo de captura específico, se agrega el extracto de tejido, y un segundo anticuerpo conjugado con enzima revela la unión por color medido en lector de placas, contra controles positivo y negativo y un umbral de corte propio del laboratorio. La inmunoimpresión directa es una variante de campo elegante: se corta el brote con hoja de afeitar y se apoya la sección sobre una membrana, que queda impresa con los tejidos; la membrana se revela con los mismos anticuerpos y permite ver en qué parte del corte está el virus, lo que sirve para procesar muchas muestras con poco equipamiento.

Analito (qué se busca)

Virus de la tristeza de los cítricos

Matriz (en qué muestra)

Material de propagación cítrico bajo certificación: plantas madre originales y de reserva, material de fundación, plantas yemeras y plantas certificadas de vivero

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Lector de microplacas con filtro en el visible; lavador de placas; incubadora; homogeneizador o molinillo de tejido; heladera; para la inmunoimpresión, lupa estereoscópica y hoja de bisturí.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Equipo DAS-ELISA para CTV con anticuerpo de captura y conjugado; tampones de extracción, lavado y sustrato; membranas de nitrocelulosa para inmunoimpresión; controles positivo y negativo de referencia.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Microplacas; micropipetas multicanal; bolsas de extracción; planilla con la identificación de la planta madre, la fecha y el punto de la copa de donde salió cada brote.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Placas; puntas; membranas; reactivos y controles.

Unidad

Ninguna · detectable o no detectable respecto del valor de corte · relación entre la absorbancia de la muestra y la del control negativo

Rango de referencia

Una planta puede estar infectada y verse sana si la combinación de injerto y pie es tolerante: el resultado serológico manda sobre la inspección visual, no al revés. Ojo: el virus se distribuye de manera despareja en el árbol, así que un negativo sobre un solo brote no descarta la infección; la muestra se toma de varios puntos de la copa. El análisis sólo vale si lo hace un laboratorio habilitado por el INASE: la habilitación técnica está reglada por la Resolución INASE 201/2022, y el laboratorio tiene que estar inscripto en el Registro Nacional de Comercio y Fiscalización de Semillas

Norma que lo exige

El Programa Nacional de Certificación de Cítricos, cuyas normas de funcionamiento de los laboratorios de diagnóstico aprobó la Resolución SAGPyA 98/2003; la Ley 20.247 de Semillas y Creaciones Fitogenéticas y su Decreto reglamentario 2.183/91, que hacen obligatoria la certificación del material cítrico

Norma que describe la técnica

La Resolución SAGPyA 98/2003, que aprueba las normas de funcionamiento del laboratorio, la técnica de invernáculo, la extracción de muestras y la certificación del diagnóstico; los procedimientos del laboratorio habilitado, con su umbral de corte documentado

Edición y vigencia de la norma

Resolución SAGPyA 98/2003 vigente; insertos vigentes de los equipos serológicos en uso

Volumen de muestra

De 4 a 8 brotes jóvenes con hojas por planta, tomados de distintos puntos de la copa

Conservación y transporte

Las muestras de brotes y hojas se toman con tijera desinfectada entre planta y planta, se identifican con la planta de origen y viajan refrigeradas de 4 a 8 grados, en bolsa cerrada y sin que se deshidraten. El cítrico distribuye los patógenos de manera despareja dentro del árbol, así que la toma se hace de varios puntos de la copa y no de una sola rama: una muestra de un solo brote puede dar negativo en una planta infectada.

Límite de detección típico

Lo declara el equipo comercial en uso; la inmunoimpresión es comparable al DAS-ELISA en tejidos con carga viral alta

Incertidumbre típica

El resultado es cualitativo contra un valor de corte. La variabilidad dominante es la del muestreo dentro de la planta, no la del ensayo

Área

Agronomía; Microbiología

Fecha de última actualización: 4/10/2026

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