Virus Y de la papa (PVY) en papa semilla por DAS-ELISA sobre brote apical

Fundamento

El virus Y de la papa es un potyvirus que se transmite por áfidos de manera no persistente y, sobre todo, por el propio tubérculo: la papa se propaga vegetativamente, de modo que un tubérculo infectado da una planta infectada y la infección se arrastra multiplicación tras multiplicación. Esa degeneración progresiva es la razón de ser de todo el sistema de fiscalización de papa semilla: sin renovación periódica a partir de material sano, el rendimiento cae año a año. El análisis no se hace sobre el tubérculo dormido sino sobre el brote, y ahí está la particularidad del método: hay que romper la dormición y esperar a que los tubérculos broten de manera uniforme, porque recién entonces el virus alcanza en el tejido joven una concentración que el ensayo detecta. La norma es explícita en que no puede analizarse hasta que pasen tres semanas desde el inicio de la ruptura de dormición, y que se usa un brote por tubérculo, el apical. Sobre el extracto de ese brote se corre un DAS-ELISA: anticuerpo de captura en el pocillo, extracto, conjugado enzimático y lectura de color. La norma exige anticuerpos policlonales, prueba de diluciones cada vez que se abre un lote nuevo de anticuerpo, y un mínimo de testigos por placa: dos positivos, uno de ellos de baja concentración, y testigos sanos.

Analito (qué se busca)

Virus Y de la papa

Matriz (en qué muestra)

Tubérculos de papa semilla de las distintas categorías y subcategorías bajo fiscalización, enviados por el semillerista al laboratorio de la red inscripta en el INASE

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Lector de microplacas con filtro de 405 nm; lavador de placas; incubadora; cámara o recinto de brotación con control de temperatura y humedad; homogeneizador de tejido; heladera.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Equipo DAS-ELISA para PVY con anticuerpos policlonales de captura y conjugado; tampones de extracción, lavado y conjugado, con leche descremada si el protocolo la usa; sustrato; testigos positivos de alta y de baja concentración y testigos sanos, acordes a la variedad de la muestra.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Microplacas; micropipetas multicanal; registro de ingreso de muestras, registro de brotación con fecha de inicio y fin y porcentaje de tubérculos brotados, y registro de análisis con las lecturas del lector de microplacas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Placas; puntas; reactivos y testigos.

Unidad

1 · % de tubérculos positivos en la muestra, con una cifra decimal

Rango de referencia

El resultado se informa en el Certificado de Sanidad de Papa Semilla con una sola cifra decimal. Son positivas las muestras cuya absorbancia a 405 nm supera la media de los tres testigos sanos más tres veces el desvío estándar; por debajo de ese valor se consideran sanas, y si el cálculo da una interpretación dudosa decide el Director Técnico. Ojo: la lectura tiene que hacerse con lector de microplacas y el informe basarse en esa lectura, no en la apreciación visual del color; y la norma sólo permite anticuerpos policlonales. Los testigos positivos y sanos tienen que ser acordes a la variedad de la muestra

Norma que lo exige

Los diagnósticos obligatorios de enfermedades y nematodos transmitidos a las categorías y subcategorías de papa semilla, según el Anexo III de la Resolución INASE 476/2023, Normas de Funcionamiento de Laboratorios de Análisis Fitosanitarios de Papa Semilla; la Ley 20.247 de Semillas y Creaciones Fitogenéticas y su Decreto 2.183/91. El laboratorio sólo puede hacer los ensayos para los que el INASE lo haya habilitadonorma argentina

Norma que describe la técnica

El Anexo III de la Resolución INASE 476/2023, que fija la brotación previa, el uso del brote apical, los anticuerpos policlonales, los testigos por placa y la lectura obligatoria en lector de microplacas; el protocolo de análisis virológico del laboratorio con su documento de adopción del método, aprobado por la Dirección de Evaluación de Calidad del INASEnorma argentina

Edición y vigencia de la norma

Resolución INASE 476/2023 vigente, Anexo III; protocolo de análisis virológico vigente del laboratorio con su documento de adopción del método

Volumen de muestra

El número de tubérculos que fija la norma para la categoría, divididos en grupos para el procesamiento

Conservación y transporte

Los tubérculos llegan identificados y se registran con número de ingreso, peso del lote, procedencia, especie y número de tubérculos. Antes de cualquier análisis virológico hay que brotarlos: no se puede analizar hasta que pasen tres semanas desde el inicio de la ruptura de dormición, y los tubérculos tienen que estar uniformemente brotados. Se usa un brote por tubérculo procesado. Un lote analizado antes de tiempo da negativos que no significan nada, porque el virus todavía no alcanzó concentración detectable en el brote.

Límite de detección típico

Lo determina el criterio de positividad de la norma: media de los tres testigos sanos más tres desvíos estándar, de modo que el límite lo fija cada placa y no una cifra fija

Incertidumbre típica

El resultado por tubérculo es cualitativo; el porcentaje del lote arrastra la incertidumbre del muestreo, que con pocas decenas de tubérculos es considerable

Área

Agronomía; Microbiología

Fecha de última actualización: 4/10/2026

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