Anatoxina-a por LC-MS/MS y por ELISA

Fundamento

La muestra se congela apenas llega, y ese congelado es parte del método: rompe las células y libera la toxina que está adentro, que en plena floración es la mayor parte del total. El extracto se mide por cromatografía líquida con masas en tándem, con inmunoensayo como tamizaje. Si interesa separar lo disuelto de lo intracelular hay que filtrar antes de congelar y analizar el filtrado y el filtro por separado. La anatoxina-a es inestable: se degrada con la luz y a pH alcalino, así que el frasco ámbar y el congelado rápido no son recomendaciones sino condiciones del ensayo.

Analito (qué se busca)

Anatoxina-a

Matriz (en qué muestra)

Agua de embalses y de potabilizadoras; agua de recreación

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Cromatógrafo líquido con espectrómetro de masas en tándem; lector de microplacas para inmunoensayo; equipo de extracción en fase sólida; sonicador; freezer de menos 20 grados.

Proveedores de Cromatografía líquida (HPLC/UPLC) · Espectrometría de masas.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Patrón certificado de anatoxina-a; kits de inmunoensayo; metanol y acetonitrilo de grado espectrometría; ácido fórmico.

Proveedores de Reactivos y solventes · Patrones y materiales de referencia.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Frascos de vidrio ámbar de 500 mL a 1 L; viales; filtros de fibra de vidrio; microplacas; registro de si se separó la fracción disuelta de la intracelular.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Patrones certificados, que son caros y de vida corta; kits ELISA.

Proveedores de Patrones y materiales de referencia.

Unidad

µg/L · ng/L · toxina intracelular y extracelular por separado

Rango de referencia

Tiene valor guía de la Organización Mundial de la Salud desde la adenda de 2020; los niveles de interés son de microgramos por litro

Norma que lo exige

Guías provinciales de vigilancia de cianobacterias; Guías de la OMS para la calidad del agua de consumo humano, 4ª edición, que en su adenda de 2020 fija valores guía para cilindrospermopsina y anatoxina-anorma internacional

Norma que describe la técnica

ISO 20179 (microcistinas, como referencia metodológica del grupo); EPA 545 (cilindrospermopsina y anatoxina-a); métodos de la AOAC para saxitoxinasnorma internacional

Edición y vigencia de la norma

Adenda 2020 de las guías de la OMS; EPA 545 (2015)

Volumen de muestra

500 mL a 1 L en frasco de vidrio ámbar

Conservación y transporte

Se congela apenas llega, y ese congelado es parte del método: rompe las células y libera la toxina que está adentro, que en una floración es la mayor parte del total. Si interesa separar la fracción disuelta de la intracelular hay que filtrar antes de congelar y analizar el filtrado y el filtro por separado. No se agrega conservante químico. Vidrio y no plástico, porque varias de estas toxinas se adsorben.

Límite de detección típico

0,05 a 0,2 µg/L por LC-MS/MS

Incertidumbre típica

±20 a 30%; el ELISA sobreestima cuando hay variantes que el anticuerpo reconoce parcialmente

Área

Aguas; Toxicología; Microbiología

Fecha de última actualización: 1/10/2026

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