Clorofila a y feopigmentos por extracción con acetona y espectrofotometría o fluorimetría

Fundamento

La muestra se filtra por fibra de vidrio, que retiene el fitoplancton. El filtro se macera en acetona al 90% en frío y oscuridad para extraer los pigmentos. El extracto se lee en espectrofotómetro a 665 y 750 nm, o en fluorímetro, antes y después de acidificarlo: la acidificación convierte la clorofila a en feofitina, y la diferencia entre ambas lecturas separa el pigmento activo del degradado.

Analito (qué se mide)

Clorofila a y feopigmentos

Matriz (en qué muestra)

Embalses; lagunas; ríos; agua cruda

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Espectrofotómetro con celdas de 1 a 10 cm, o fluorímetro; equipo de filtración por vacío; homogeneizador o mortero; centrífuga; heladera.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Acetona al 90%; carbonato de magnesio; ácido clorhídrico diluido; patrón de clorofila a.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Filtros de fibra de vidrio GF/F; tubos de centrífuga ámbar; pinzas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Filtros; acetona; patrón de clorofila.

Unidad

µg/L · mg/m³ · % de feopigmentos sobre el total

Rango de referencia

Clasificación trófica: oligotrófico por debajo de 2,5 µg/L, eutrófico por encima de 8 µg/L, hipereutrófico por encima de 25 µg/L

Norma que lo exige

Programas provinciales de monitoreo de calidad de cuerpos de agua; Ley 24.051 de residuos peligrosos y su Decreto 831/93, Anexo II, niveles guía de calidad de agua para protección de la vida acuáticanorma internacional

Norma que describe la técnica

ISO 10260; APHA Standard Methods 10200 H; EPA 445.0 (fluorimetría)norma internacional

Edición y vigencia de la norma

ISO 10260:1992, vigente

Volumen de muestra

1 a 2 L si el agua es clara; 250 mL en aguas con floración

Conservación y transporte

Lo ideal es filtrar en el lugar y guardar el filtro, no el agua: la clorofila se degrada en horas con la luz. Si se filtra en el laboratorio, la muestra va en frasco opaco, refrigerada, y se procesa el mismo día. El filtro se conserva doblado en papel de aluminio a -20 °C y así aguanta semanas. Todo el trabajo de extracción se hace en penumbra: la luz del propio laboratorio destruye el pigmento en el extracto.

Límite de detección típico

0,1 µg/L con celda de 10 cm; menos por fluorimetría

Incertidumbre típica

±10 a 20%; el reparto entre clorofila y feopigmentos depende de la exactitud del paso de acidificación

Área

Aguas; Ambiental; Química analítica

Fecha de última actualización: 8/9/2026