Detección de amebas de vida libre por cultivo en agar no nutritivo con E. coli y confirmación por PCR

Fundamento

La muestra se concentra por filtración o centrifugación y el sedimento se siembra en agar no nutritivo cubierto con una capa de Escherichia coli inactivada, que es el alimento de las amebas. Incubando a 30 °C y a 44 °C —esta última selectiva para las especies termotolerantes, que son las patógenas— las amebas migran por la placa dejando surcos visibles. La identificación de especie se confirma por PCR sobre el cultivo.

Analito (qué se busca)

Amebas de vida libre

Matriz (en qué muestra)

Agua de piletas y parques acuáticos; agua termal; torres de enfriamiento; agua de red

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Estufas a 30 °C y a 44 °C; microscopio invertido; equipo de filtración; termociclador; cabina de seguridad biológica nivel 2.

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Reactivos¿Dónde lo compro?

Agar no nutritivo; suspensión de E. coli inactivada; solución de Page; cebadores y mezclas de PCR específicos.

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Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Membranas de 1,2 µm; placas de Petri; asas; tubos de PCR.

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Consumibles¿Dónde lo compro?

Medios; membranas; reactivos de PCR.

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Unidad

1/m³ · Presencia o ausencia en el volumen ensayado · identificación de especie · Amebas por litro

Rango de referencia

No hay valor límite establecido: para las especies patógenas el criterio es ausencia en el volumen analizado

Norma que lo exige

Normativa provincial y municipal de habilitación de piletas de natación y parques acuáticos; Guías de la OMS para la calidad del agua de consumo humano, 4ª edición, capítulo de aguas recreativasnorma internacional

Norma que describe la técnica

ISO 13843 para la validación de métodos microbiológicos; protocolos de los CDC para Naegleria fowleri; métodos publicados por la OMS en las guías de ambientes acuáticos recreativosnorma internacional

Edición y vigencia de la norma

Guías de la OMS para ambientes acuáticos recreativos, volumen 2

Volumen de muestra

1 a 10 L de agua, o hisopado del biofilm de paredes y del sedimento del fondo

Conservación y transporte

Las amebas viven pegadas al biofilm y en el sedimento, no flotando: una muestra de agua clara del medio de la pileta puede dar negativa mientras las paredes están colonizadas. Conviene sumar un raspado del fondo y de las paredes. No se refrigera por debajo de 15 °C ni se congela, porque las amebas se enquistan o mueren y el cultivo no crece; se transporta a temperatura ambiente y se siembra dentro de las 24 horas. Se anota la temperatura del agua, que es el factor que más determina el riesgo.

Límite de detección típico

1 ameba por litro con concentración de 10 L

Incertidumbre típica

El resultado es cualitativo o semicuantitativo; la sensibilidad depende mucho del volumen y del punto de muestreo

Área

Aguas; Microbiología; Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 8/9/2026

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