Detección y enumeración de coliformes, Escherichia coli y Pseudomonas aeruginosa en agua por el método del número más probable

Fundamento

El procedimiento siembra alícuotas de la muestra y de sus diluciones en series de tubos con un medio de cultivo selectivo y líquido; tras la incubación se registra en cuáles hubo crecimiento con las características esperadas —producción de gas, cambio de color del indicador, fluorescencia bajo luz ultravioleta en los medios con sustrato enzimático para Escherichia coli—, y con el patrón de tubos positivos y negativos se estima la concentración más probable de microorganismos mediante tablas o cálculo estadístico basado en la distribución de Poisson. Es una estimación y no un recuento: su intervalo de confianza es amplio y se informa junto con el valor. La versión de presencia o ausencia, con un solo recipiente de volumen definido, es la que responde la pregunta que hace la reglamentación de agua potable, que exige ausencia en cien mililitros. Los medios modernos con sustratos cromogénicos y fluorogénicos permiten distinguir en el mismo tubo los coliformes totales de Escherichia coli, lo que evita la subcultura de confirmación y acorta el resultado a un día. Pseudomonas aeruginosa tiene su propio esquema, relevante en agua envasada, en piscinas y en agua de uso hospitalario, donde es un patógeno oportunista que la reglamentación exige ausente.

Matriz (en qué muestra)

Agua potable de red, de pozo y de camión cisterna; agua turbia o con alta carga de partículas; agua de recreación y de piscinas; agua envasada; agua de establecimientos rurales sin red

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Estufas de incubación a las temperaturas del método; baño termostático; cabina de seguridad biológica; lámpara de luz ultravioleta para los medios fluorogénicos; autoclave; pipetas automáticas; contador y tablas de número más probable.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Medios líquidos selectivos con campana de fermentación o con sustratos cromogénicos y fluorogénicos; medios de confirmación; agua de dilución con peptona; tiosulfato de sodio; cepas de referencia certificadas.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Tubos con campana; recipientes de presencia o ausencia; pipetas estériles; frascos de muestreo estériles con tiosulfato; planillas de patrón de tubos positivos.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Medios; tubos; pipetas; cepas de referencia.

Unidad

1/m³ · número más probable por 100 mL y su intervalo de confianza · resultado de presencia o ausencia en el volumen reglamentario · patrón de tubos positivos por dilución · confirmaciones realizadas y medios empleados · cloro residual de la muestra y neutralización aplicada

Rango de referencia

La reglamentación de agua de consumo exige ausencia de coliformes y de Escherichia coli en cien mililitros, de modo que el resultado relevante es binario; la enumeración por número más probable se usa cuando hay que dimensionar una contaminación, y su intervalo de confianza es tan amplio que dos resultados que difieren al doble pueden no ser distintos

Norma que lo exige

El Código Alimentario y las reglamentaciones provinciales de agua de consumo humano, que exigen ausencia de coliformes y de Escherichia coli en cien mililitros; las normas de agua envasada y de agua de recreación; los requisitos de control de agua de establecimientos de salud; las normas de acreditación del laboratorionorma argentina

Norma que describe la técnica

IRAM 29107-2, que fija la detección mediante presencia o ausencia y la enumeración por el método del número más probable con tubos múltiples de organismos coliformes y Escherichia coli; IRAM 29106, sobre la detección y enumeración de Pseudomonas aeruginosa por los mismos procedimientos; IRAM 29107-1 e IRAM 29108, sobre las versiones por filtración por membrana; IRAM 29012-5, sobre el muestreo de agua potablenorma argentina

Edición y vigencia de la norma

IRAM 29107-2:2023; IRAM 29106:2024; IRAM 29107-1:2015; IRAM 29108:2008; IRAM 29012-5:2026

Volumen de muestra

Destructivo. De 100 a 300 mL de agua por determinación

Conservación y transporte

Los frascos llevan tiosulfato cuando el agua está clorada, porque el cloro residual sigue matando durante el transporte y el resultado sale negativo por el motivo equivocado. El tiempo entre la toma y la siembra se respeta y se registra, dado que fuera de él la flora se modifica. El intervalo de confianza se informa junto con el número más probable: presentarlo como un recuento exacto es engañoso y lleva a discutir diferencias que no existen.

Límite de detección típico

Un microorganismo en el volumen total sembrado, según el esquema de tubos y diluciones

Incertidumbre típica

El intervalo de confianza del número más probable es amplio y propio del esquema empleado; se informa siempre

Área

Aguas; Microbiología; Higiene y seguridad

Fecha de última actualización: 11/9/2026