Ensayo de viabilidad de semillas por tetrazolio y diagnóstico de daños

Fundamento

Las semillas se acondicionan con agua para que se hidraten sin dañarse, se cortan o se punzan según la técnica de cada especie para que la solución llegue al embrión, y se sumergen en una solución de cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio en oscuridad y a temperatura controlada durante algunas horas. En los tejidos vivos, las enzimas deshidrogenasas de la respiración celular reducen la sal de tetrazolio, que es incolora y soluble, a formazán, que es rojo e insoluble y queda depositado en el tejido: lo vivo se tiñe de rojo y lo muerto queda blanco. Cada semilla se corta longitudinalmente y se examina con lupa, y se evalúa no solo si hay tinción sino dónde: la norma define para cada especie qué zonas del embrión y de los tejidos de reserva son críticas, con qué intensidad y extensión de daño la semilla todavía puede dar una plántula normal y con cuáles no, y cada semilla se clasifica como viable o no viable. La intensidad de la tinción también informa: un rojo muy intenso indica tejido en deterioro con membranas dañadas que absorben la solución con exceso. El patrón de las zonas no teñidas es lo que permite el diagnóstico de la causa: los daños mecánicos aparecen como zonas necrosadas en el eje o en los cotiledones coincidentes con golpes, las picaduras de chinche dejan lesiones puntuales rodeadas de tejido dañado, y el deterioro por envejecimiento se ve como una pérdida difusa de tinción en los extremos del eje embrionario. El análisis lo hacen analistas entrenados y calificados.

Matriz (en qué muestra)

Semilla de soja, maíz, trigo, girasol, forrajeras y especies de germinación lenta o con latencia; lotes recién cosechados

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Estufa o baño a temperatura controlada; lupa estereoscópica con iluminación; heladera; bisturíes y hojas; recipientes de tinción; cámara para documentar los patrones.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Cloruro de 2,3,5-trifeniltetrazolio; soluciones tampón para ajustar el pH de la solución; agua destilada.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Papel de germinación para el acondicionamiento; placas y vasos de tinción; pinzas; bandejas de evaluación.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Tetrazolio; papel; hojas de bisturí.

Unidad

% · % de semillas viables · % de semillas con cada tipo y nivel de daño

Rango de referencia

Se analizan al menos 100 semillas en repeticiones de 50 o 25; la viabilidad por tetrazolio suele ser algo mayor que el poder germinativo, porque incluye semillas viables pero con latencia o con daños que impiden germinar en condiciones de laboratorio

Norma que lo exige

Ley 20.247 de semillas y las resoluciones del INASE, que aceptan el tetrazolio como estimación de la viabilidad y lo exigen en especies con latencia y en situaciones donde el poder germinativo no es concluyente; los protocolos de recibo de semilleros y de acopios; los estándares de comercialización y los contratos de multiplicación

Norma que describe la técnica

Las Reglas Internacionales para el Análisis de Semillas de la ISTA, capítulo de ensayo de viabilidad por tetrazolio, con las tablas de preparación, tinción y criterios de evaluación por especie; el manual de tetrazolio de la Association of Official Seed Analysts; los manuales del INASE y de la Asociación Argentina de Analistas de Semillas para las especies locales

Edición y vigencia de la norma

Reglas ISTA, edición 2024; manual de tetrazolio de la AOSA, vigente

Volumen de muestra

100 a 200 semillas por lote, tomadas de la muestra de trabajo homogeneizada

Conservación y transporte

La hidratación previa tiene que ser lenta y controlada, porque una semilla seca sumergida de golpe en agua sufre daño por imbibición y aparece como no viable sin serlo, sobre todo en soja y poroto. La solución de tetrazolio se prepara con el pH ajustado y se conserva en oscuridad, ya que la luz la degrada. La temperatura y el tiempo de tinción son los que fija la norma para cada especie: sobre teñir enmascara los daños y sub teñir los exagera. La evaluación exige entrenamiento y participación en ensayos de aptitud, porque la interpretación de los patrones es la parte que define el resultado.

Límite de detección típico

No aplica; es un ensayo por semilla individual

Incertidumbre típica

Tolerancias tabuladas por la ISTA entre repeticiones y entre analistas; la concordancia entre analistas entrenados es del orden de 5 puntos porcentuales

Área

Agronomía; Biología molecular

Fecha de última actualización: 9/9/2026