Virus entéricos en agua por concentración y RT-qPCR

Fundamento

Un volumen grande de agua se concentra por filtración con membranas electropositivas o por ultrafiltración, y el concentrado se reduce por floculación con leche descremada o con polietilenglicol. Del concentrado se extrae el ácido nucleico y se amplifica por transcripción reversa seguida de PCR en tiempo real, con sondas específicas para norovirus, rotavirus, enterovirus y virus de la hepatitis A. Un virus control agregado al principio mide la eficiencia de todo el proceso.

Analito (qué se mide)

Virus entéricos

Matriz (en qué muestra)

Agua potable; agua superficial; agua de recreación; efluente

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Sistema de ultrafiltración o filtros electropositivos; centrífuga refrigerada; termociclador en tiempo real; cabina de bioseguridad; freezer a -80 °C.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Kits de extracción de ácidos nucleicos; mezclas de RT-qPCR con sondas; controles de proceso (mengovirus o virus mosaico); leche descremada; cloruro de magnesio.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Tubos libres de nucleasas; puntas con filtro; membranas de filtración.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Membranas y filtros de ultrafiltración; kits, que son el costo principal.

Unidad

Copias genómicas por litro · UFP/L si se hace cultivo celular · % de recuperación del control de proceso

Rango de referencia

En agua potable la exigencia es ausencia. En efluente cloacal crudo se miden millones de copias por litro

Norma que lo exige

Código Alimentario Argentino, artículo 982 (agua potable de suministro público y de uso domiciliario) exige ausencia de virus en agua potable sin fijar método; guías de la OMS y protocolos de vigilancia del Ministerio de Saludargentina e internacional

Norma que describe la técnica

ISO 15216-1 (norovirus y hepatitis A, adaptable a agua); EPA 1615 (enterovirus y norovirus); APHA Standard Methods 9510argentina e internacional

Edición y vigencia de la norma

ISO 15216-1:2017, vigente; EPA 1615 (2012)

Volumen de muestra

10 a 100 L de agua potable filtrados en el lugar; 1 a 2 L de agua superficial; 200 mL de efluente crudo

Conservación y transporte

La filtración se hace en el sitio, porque llevar 100 litros al laboratorio no es viable y los virus se pierden por adsorción en el bidón. El concentrado se transporta en frío y se congela a -80 °C si no se procesa en el día; los ciclos de congelado y descongelado degradan el ARN, así que conviene fraccionarlo en alícuotas. Se agrega tiosulfato si el agua está clorada. El resultado positivo por PCR no distingue virus infeccioso de virus muerto, y eso hay que decirlo en el informe.

Límite de detección típico

10 a 100 copias genómicas por litro, según el volumen concentrado

Incertidumbre típica

La recuperación del proceso varía entre el 10 y el 80%: el resultado se corrige por ella y se informa junto con el valor

Área

Aguas; Biología molecular; Microbiología

Fecha de última actualización: 8/9/2026