Actividad de biotinidasa en gota de sangre seca para pesquisa de su deficiencia

Fundamento

La biotinidasa es la enzima que recicla la biotina, liberándola de las proteínas a las que quedó unida tras cumplir su función como cofactor de las carboxilasas. Si falta, el organismo pierde biotina por orina y queda en deficiencia funcional aunque la dieta la aporte, lo que lleva a convulsiones, hipotonía, dermatitis, alopecia y, si el cuadro se prolonga, a hipoacusia neurosensorial y atrofia óptica que no revierten. El tratamiento es biotina por vía oral de por vida, barata y sin complicaciones, lo que hace que el valor del tamizaje dependa casi por completo de llegar antes de que el daño sensorial se instale. La determinación no mide concentración sino actividad: se eluye el disco de papel de filtro y se incuba el eluido con un sustrato análogo, habitualmente biotinil-p-aminobenzoato, que la enzima hidroliza liberando p-aminobenzoato; éste se revela por diazotación y acoplamiento, dando un color que se lee en placa, o bien se usa un sustrato fluorogénico. El resultado se informa como actividad normal, parcialmente deficiente o profundamente deficiente, por comparación con los controles de la corrida. El punto delicado es la estabilidad: la enzima se inactiva con el calor y la humedad, de modo que una tarjeta mal secada o que viajó en verano sin protección da actividad falsamente baja y genera una recitación innecesaria.

Analito (qué se busca)

Biotinidasa

Matriz (en qué muestra)

Sangre entera de talón del recién nacido secada en papel de filtro, tomada a partir de las cuarenta y ocho horas de vida

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Troqueladora de discos; lector de placas colorimétrico o fluorométrico; incubadora y agitador de placas.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Sustrato de biotinidasa, biotinil-p-aminobenzoato o análogo fluorogénico; reactivos de revelado por diazotación; controles de actividad normal y deficiente provistos con el equipo; tampón de elución.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Tarjetas de papel de filtro; placas; micropipetas; registro de la fecha de la toma y de las condiciones de secado y envío de la tarjeta.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Tarjetas; discos; placas; puntas; reactivos y controles.

Unidad

kat · actividad normal, parcialmente deficiente o profundamente deficiente, respecto de los controles de la corrida · nmol de p-aminobenzoato por minuto y por mL de sangre

Rango de referencia

El resultado del tamizaje no es un diagnóstico: un valor por encima del corte manda a recitar al bebé para una muestra de confirmación, y la confirmación es la que diagnostica. Ojo: la enzima se inactiva con el calor y la humedad, así que una tarjeta mal secada o que viajó sin protección en verano da actividad falsamente baja y manda a recitar a un bebé sano; antes de repetir conviene revisar cómo llegó la muestra

Norma que lo exige

La ley nacional de pesquisa neonatal obligatoria y su reglamentación, que impone el tamizaje a todo recién nacido; los programas provinciales de pesquisa, que fijan el circuito de recitación y confirmación

Norma que describe la técnica

Los insertos de los equipos de pesquisa neonatal; los procedimientos del programa documentados por el laboratorio

Edición y vigencia de la norma

Insertos vigentes de los equipos en uso; protocolos vigentes del programa de pesquisa neonatal

Volumen de muestra

Unas gotas de sangre de talón que llenen por completo los círculos marcados en la tarjeta de papel de filtro

Conservación y transporte

La tarjeta se seca al aire en posición horizontal, a temperatura ambiente y sin calor directo, durante al menos tres horas, y nunca se apila húmeda ni se mete en bolsa plástica antes de secar: la humedad arruina la muestra y obliga a repetir la punción. Seca, se envía en sobre de papel y se conserva refrigerada si el envío se demora. La fecha y la hora de la toma y las horas de vida del bebé viajan con la tarjeta, porque todos los valores de corte dependen de ellas. Para este analito en particular la temperatura del transporte es crítica, porque la enzima pierde actividad con el calor.

Límite de detección típico

Lo declara el inserto del equipo; el resultado se expresa contra los controles de actividad de la corrida

Incertidumbre típica

La actividad medida depende del estado de conservación de la tarjeta tanto como del ensayo

Área

Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 1/10/2026

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