Ensayo cinético enzimático (velocidad inicial)

Fundamento

Se sigue la absorbancia (u otra señal) del producto en función del tiempo y se toma la pendiente en la zona lineal inicial; esa velocidad, dividida por la masa o el volumen de muestra, expresa la actividad.

Matriz (en qué muestra)

Mezcla de reacción

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Espectrofotómetro con control de temperatura y modo cinético; baño termostatizado; cronómetro/timer.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Sustrato específico; buffer; patrones de la enzima.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Cubetas; micropipetas; matraces.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Puntas de pipeta; cubetas descartables.

Unidad

s · s · min

Rango de referencia

La ventana lineal suele ser de 1-5 min; verificar que el sustrato no se agote

Norma que describe la técnica

Recomendaciones IFCC / IUBMB para métodos enzimáticos

Edición y vigencia de la norma

Métodos y recomendaciones de la IFCC para bioquímica clínica, con trazabilidad a métodos de referencia. Acá no importa tanto la edición como que el método esté certificado y sea trazable: para HbA1c, la certificación NGSP se renueva todos los años.

Volumen de muestra

1 a 3 mL de la mezcla de reacción, o lo que pida la cubeta

Conservación y transporte

La reacción se lee en el momento y a temperatura controlada: 37 °C para enzimas clínicas. El sustrato y la enzima se guardan por separado a 4 °C hasta el momento de mezclar.

Límite de detección típico

1 U/L de actividad

Incertidumbre típica

±5 a 10%; la temperatura es la variable crítica

Área

Química analítica; Clínico/bioquímico; Biología molecular

Fecha de última actualización: 3/9/2026