ADN

Fundamento

La separación de ADN por electroforesis capilar es el fundamento de la secuenciación de Sanger y del genotipado de marcadores STR, y la razón es su resolución: en un gel de polímero dentro del capilar, dos fragmentos que difieren en un solo par de bases se separan limpiamente. Los fragmentos se marcan con fluoróforos y se detectan por fluorescencia al pasar por la ventana, lo que permite distinguir varios marcadores en la misma corrida usando colores distintos. El tamaño de cada fragmento se asigna comparando con un patrón interno de tamaños que corre junto con la muestra, no por el tiempo absoluto de migración.

Analito (qué se busca)

ADN

Matriz (en qué muestra)

Aguas y bebidas; fluidos biológicos; productos farmacéuticos; alimentos; extractos vegetales; muestras forenses

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Sistema de electroforesis capilar con fuente de alta tensión, control de temperatura del capilar, inyección hidrodinámica y electrocinética, automuestreador y detector de arreglo de diodos; opcionalmente detector de fluorescencia inducida por láser o interfaz a espectrometría de masas.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Tampones de separación (borato, fosfato, acetato) de alta pureza; tensioactivos (dodecilsulfato de sodio) para la modalidad micelar; ciclodextrinas para la quiral; hidróxido de sodio y ácido clorhídrico para acondicionar el capilar; patrones y marcadores de flujo electroosmótico.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Capilares de sílice fundida recubiertos y sin recubrir; viales; filtros de 0,22 micrones; herramienta de apertura de ventana.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Capilares; tampones; ciclodextrinas; viales.

Unidad

kg/m³

Norma que lo exige

Las farmacopeas, que incluyen métodos de electroforesis capilar para identidad, pureza y pureza enantiomérica; ICH Q6A y las guías de impurezas quirales; las normas de calidad de agua y de bebidas para aniones y cationes cuando el método está validado; ISO/IEC 17025 para los laboratorios acreditadosnorma internacional

Norma que describe la técnica

USP <727> para la electroforesis capilar; Farmacopea Europea 2.2.47; las recomendaciones de la IUPAC sobre nomenclatura y presentación de datos de electroforesis capilar; ISO 21571 no se cita; los métodos validados de cada aplicaciónnorma internacional

Edición y vigencia de la norma

USP <727>, USP-NF 2024; Farmacopea Europea 2.2.47, 11.ª edición

Volumen de muestra

50 a 200 µL de muestra en el vial, de los que se inyectan unos pocos nanolitros

Conservación y transporte

El capilar se acondiciona con hidróxido de sodio, agua y tampón antes de cada secuencia y entre corridas; una pared sucia cambia el flujo electroosmótico y con él todos los tiempos de migración, que es la causa principal de irreproducibilidad. La temperatura del capilar se controla porque la viscosidad del tampón y la corriente dependen de ella. Las muestras se filtran y su fuerza iónica se mantiene baja frente a la del tampón para lograr el efecto de apilamiento que concentra la banda al inyectar. Los tampones se preparan frescos y se descartan a diario.

Área

Química analítica; Farmacéutico; Biología molecular

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Fecha de última actualización: 5/10/2026

Ficha N.º 4384 · ¿Ves algo para corregir? Escribinos