Antígenos citoplasmáticos de linfocitos por citometría de flujo multiparamétrica

Fundamento

La muestra se marca con un panel de anticuerpos conjugados a fluorocromos y pasa célula por célula frente a los láseres: cada una se describe por su tamaño, su complejidad y los marcadores que expresa. Lo que convierte esto en un diagnóstico es el análisis multiparamétrico, que busca combinaciones de marcadores y no marcadores sueltos. La muestra se procesa dentro de las 24 a 48 horas y no se congela: las células mueren y los antígenos se pierden. Para los marcadores que están dentro de la célula hay un paso más: se permeabiliza la membrana sin destruirla, lo que permite que el anticuerpo entre. Es el paso más delicado del procedimiento, porque pasarse arruina la célula y quedarse corto deja el marcador sin teñir.

Analito (qué se busca)

Antígenos citoplasmáticos de linfocitos

Matriz (en qué muestra)

Sangre entera con EDTA o heparina; médula ósea; ganglio y otros tejidos en suspensión; líquidos de punción

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Citómetro de flujo multiparamétrico de 8 a 12 colores con dos o tres láseres, con sus programas de adquisición y análisis; centrífuga; agitador; cabina de seguridad biológica; contador hematológico.

Proveedores de Baños, agitación y homogeneización · Centrífugas.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Paneles de anticuerpos monoclonales conjugados; soluciones de lisis y de permeabilización; microesferas de calibración y de compensación; controles de proceso.

Proveedores de Metrología y calibración.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Tubos de citometría; tubos con EDTA y con heparina; filtros de nylon para suspensiones de tejido; registro de la hora de toma y de si la médula es del primer aspirado.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Anticuerpos; soluciones; microesferas; tubos.

Unidad

1 · % de células positivas por marcador · células/µL de recuento absoluto · % de células con fenotipo aberrante para enfermedad mínima residual

Rango de referencia

El resultado es la expresión o no de cada marcador intracelular; define el linaje cuando la superficie no alcanza

Norma que lo exige

Las guías de diagnóstico y tratamiento de leucemias y linfomas de la Sociedad Argentina de Hematología y de los protocolos cooperativos, que exigen inmunofenotipo al diagnóstico y evaluación de enfermedad mínima residual en los puntos del protocolo; las guías de la Dirección de Respuesta al VIH del Ministerio de Salud para el recuento de CD4; las obras sociales y el sistema de alto costo para autorizar tratamientos dirigidos; ISO 15189norma internacional

Norma que describe la técnica

Las guías del consorcio EuroFlow para paneles estandarizados de inmunofenotipo y para enfermedad mínima residual; las recomendaciones del International Council for Standardization in Haematology; CLSI H43 para el inmunofenotipo por citometría de flujo y H42 para el recuento de linfocitos; la clasificación de la OMS de tumores hematopoyéticos (2022); ISO 15189norma internacional

Edición y vigencia de la norma

Guías EuroFlow, actualizadas; CLSI H43-A2 (2007); clasificación OMS de tumores hematolinfoides, 5.ª edición (2022)

Volumen de muestra

3 a 5 mL de sangre con EDTA o heparina; 1 a 3 mL de médula ósea con heparina en el primer aspirado; los ganglios y tejidos se envían en medio de cultivo

Conservación y transporte

La muestra se procesa dentro de las 24 a 48 horas y no se refrigera por debajo de 4 grados ni se congela: las células mueren y los antígenos se pierden, sobre todo en muestras de médula y en líquidos. La médula se toma del primer aspirado, antes de que se diluya con sangre periférica, porque una médula hemodiluida no permite evaluar la enfermedad mínima residual. El citómetro se calibra cada día con microesferas y las compensaciones entre fluorocromos se verifican; un panel mal compensado inventa poblaciones. El informe describe la población, su fenotipo completo y su porcentaje, y se integra con la morfología, la citogenética y la biología molecular.

Límite de detección típico

0,01 % de células aberrantes con adquisición de un millón de eventos; una célula en diez mil en paneles estándar

Incertidumbre típica

±5 a 10 % relativo en porcentajes de poblaciones mayoritarias; mayor en poblaciones minoritarias por la estadística de conteo

Área

Clínico/bioquímico; Biología molecular; Microbiología

Fecha de última actualización: 1/10/2026

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