Bilirrubina total y directa en suero por reacción con ácido sulfanílico diazotado

Fundamento

La bilirrubina viene de la degradación del grupo hemo y circula en dos formas: la no conjugada, que viaja unida a la albúmina y es liposoluble, y la conjugada con ácido glucurónico en el hígado, que es hidrosoluble y la que el hígado excreta a la bilis. La determinación usa la reacción de diazotación: el ácido sulfanílico diazotado ataca el puente central de la molécula y la parte en dos azopigmentos coloreados, cuya absorbancia se mide en el visible. La gracia del método está en que las dos formas no reaccionan igual. La bilirrubina conjugada, hidrosoluble, reacciona sola y rápido en medio acuoso: lo que se mide así se informa como bilirrubina directa. La no conjugada, en cambio, está escondida en su unión con la albúmina y necesita un acelerante que la libere, un solvente como el metanol o la cafeína con benzoato; con el acelerante presente reaccionan las dos y se obtiene la bilirrubina total. La indirecta, que corresponde a la no conjugada, no se mide: se calcula por diferencia, y de ahí viene el nombre. Un predominio de indirecta señala hemólisis, eritropoyesis ineficaz o un defecto de la conjugación; un predominio de directa señala que el hígado conjuga bien pero no puede excretar, es decir colestasis o daño hepatocelular. La muestra se protege de la luz, porque la bilirrubina se fotodegrada en minutos.

Analito (qué se busca)

Bilirrubina

Matriz (en qué muestra)

Suero de pacientes con ictericia o sospecha de hemólisis; control de la ictericia del recién nacido; estudio de función hepática

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Autoanalizador de química clínica o espectrofotómetro con lectura en el visible; cubeta termostatizada; centrífuga.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Ácido sulfanílico y nitrito de sodio para generar el reactivo diazo; acelerante para la bilirrubina total; calibrador de bilirrubina y controles de dos niveles.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Cubetas; micropipetas; tubos y copas ámbar o protegidos de la luz.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Cubetas; puntas; reactivos y controles.

Unidad

mol/m³ · mg/dL · µmol/L

Rango de referencia

La bilirrubina indirecta no se mide: es el total menos la directa, y por eso arrastra el error de las dos. Ojo: la muestra se fotodegrada, así que una hora de mostrador junto a la ventana baja el resultado; en el recién nacido el valor se interpreta siempre contra las horas de vida y no contra un valor fijo

Norma que lo exige

Las normas de acreditación del laboratorio clínico y los programas de control de calidad externo en química clínica; los protocolos de seguimiento de la ictericia neonatal, que fijan los umbrales de tratamiento según las horas de vida

Norma que describe la técnica

Los insertos de los reactivos comerciales y los procedimientos del laboratorio; los manuales de química clínica de las sociedades científicas del área

Edición y vigencia de la norma

Insertos vigentes de los reactivos en uso; protocolos vigentes de manejo de la ictericia neonatal

Volumen de muestra

De 3 a 5 mL de sangre en tubo seco con gel separador, que dan de 1 a 2 mL de suero, o sangre capilar de talón en el recién nacido

Conservación y transporte

Se protege de la luz desde la extracción, con tubo ámbar o envuelto, y se procesa el mismo día. Refrigerada y al resguardo de la luz aguanta algunos días; la exposición a la luz del ambiente destruye una fracción apreciable del pigmento en el orden de la hora.

Límite de detección típico

Del orden de la décima de miligramo por decilitro

Incertidumbre típica

Repetibilidad del orden de unas pocas unidades por ciento en el nivel de decisión; la fracción directa es bastante menos reproducible que el total

Área

Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 1/10/2026

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