Bordetella pertussis por PCR en tiempo real

Fundamento

El blanco es ADN, de modo que se amplifica directamente, sin transcripción inversa: cebadores propios del agente y una sonda marcada que emite fluorescencia mientras el producto se acumula, y el ciclo umbral como medida indirecta de cuánto había. Cada muestra lleva su control interno de extracción y amplificación; sin él, un negativo no se puede informar como tal. En el formato multiplex varios blancos comparten la misma reacción, distinguidos por el color de cada sonda, lo que permite cubrir el panel entero con una sola muestra y en una sola corrida.

Analito (qué se busca)

Bordetella pertussis

Matriz (en qué muestra)

Hisopado nasofaríngeo y aspirado nasofaríngeo de pacientes con infección respiratoria aguda; lavado broncoalveolar en pacientes graves e inmunocomprometidos; muestras de vigilancia epidemiológica

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Termociclador en tiempo real o plataforma cerrada de cartucho con extracción y amplificación integradas; extractor automático de ácidos nucleicos; campana de seguridad biológica clase II; centrífuga; micropipetas calibradas; áreas separadas para preparación de reactivos, de muestra y de amplificación.

Proveedores de Reactivos y solventes · Micropipetas y puntas · Centrífugas.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Equipo comercial de panel respiratorio multiplex con sus cebadores, sondas y mezcla de amplificación; reactivos de extracción de ácidos nucleicos; control interno de amplificación; controles positivo y negativo; medio de transporte viral.

Proveedores de Reactivos y solventes.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Hisopado o aspirado nasofaríngeo en medio de transporte; planilla con el lote del equipo, los controles corridos, el control interno de cada muestra y los valores de ciclo umbral; datos: días de evolución, edad, comorbilidades, vacunación y contexto epidemiológico.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Equipos de extracción y de amplificación; cartuchos; hisopos; medio de transporte; puntas con filtro.

Proveedores de Micropipetas y puntas.

Unidad

Ninguna · detección o no detección de cada agente del panel · valor de ciclo umbral de cada blanco, como estimación semicuantitativa de carga · resultado del control interno de amplificación · coinfecciones detectadas · lote del equipo y controles de la corrida

Rango de referencia

La sensibilidad cae con los días de evolución y con el antibiótico ya iniciado: un negativo tardío no descarta la enfermedad y el caso se evalúa por clínica y nexo epidemiológico

Norma que lo exige

La vigilancia epidemiológica de las infecciones respiratorias agudas ante el sistema nacional de vigilancia de la salud, con notificación de los agentes de denuncia obligatoria; los protocolos de control de infecciones y de aislamiento hospitalario; los algoritmos de uso de antivirales; las normas de acreditación del laboratorio clínico

Norma que describe la técnica

Las instrucciones de uso del equipo comercial multiplex, con su lista de blancos y su desempeño declarado; los protocolos de la red nacional de laboratorios de virus respiratorios; los procedimientos del laboratorio

Edición y vigencia de la norma

Instrucciones de uso vigentes del equipo comercial de panel respiratorio, con la lista de blancos incluidos en la versión empleada

Volumen de muestra

De 1 a 3 mL de medio de transporte con el hisopado; de 2 a 5 mL de aspirado o de lavado

Conservación y transporte

La muestra va refrigerada a cuatro grados y se procesa dentro de las setenta y dos horas, o se congela a menos setenta grados si se demora más; se evitan los ciclos de congelado y descongelado, que degradan el ARN. El hisopado tiene que ser nasofaríngeo profundo: uno nasal superficial baja el rendimiento de manera apreciable.

Límite de detección típico

Del orden de 100 a 1.000 copias por mililitro según el blanco y la plataforma

Incertidumbre típica

No corresponde en sentido estricto: el resultado es cualitativo, con el ciclo umbral como referencia semicuantitativa

Área

Clínico/bioquímico; Biología molecular; Microbiología

Fecha de última actualización: 1/10/2026

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