Detección de autoanticuerpos por inmunofluorescencia indirecta y por inmunoensayo: patrón ANA, ANCA y perfil de antígenos nucleares extraíbles

Fundamento

En la inmunofluorescencia indirecta, diluciones del suero se incuban sobre portaobjetos con células HEp-2 fijadas, que tienen núcleos grandes y células en división; los autoanticuerpos del paciente se unen a sus antígenos y se revelan con un anticuerpo anti inmunoglobulina humana marcado con fluoresceína, que se observa en microscopio de fluorescencia. Lo que se informa no es solo la positividad y el título, que es la mayor dilución con fluorescencia visible, sino el patrón: homogéneo, moteado fino o grueso, nucleolar, centromérico, membrana nuclear, citoplasmático, cada uno asociado a distintos autoanticuerpos y enfermedades, según la nomenclatura internacional de patrones. Los ANCA se buscan sobre neutrófilos humanos fijados en etanol y en formol, donde se distinguen el patrón citoplasmático y el perinuclear, que después se confirman por inmunoensayo específico contra proteinasa 3 y mieloperoxidasa, hoy recomendado como primera línea. Los anticuerpos contra antígenos nucleares extraíbles (Ro, La, Sm, RNP, Scl-70, Jo-1) y el anti ADN de doble cadena se determinan por ELISA, quimioluminiscencia o inmunoblot, y el anti ADN también por inmunofluorescencia sobre Crithidia luciliae, que es muy específica de lupus. El laboratorio informa el método, porque los valores no son intercambiables entre plataformas.

Analito (qué se mide)

Anticuerpos antinucleares, anti ADN de doble cadena, antígenos nucleares extraíbles, anticitoplasma de neutrófilos, antimitocondriales y antimúsculo liso

Matriz (en qué muestra)

Suero

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Microscopio de fluorescencia con objetivos de 20 y 40 aumentos y filtros para fluoresceína, idealmente con cámara y sistema de lectura asistida; procesador automático de portaobjetos; lector de microplacas o analizador de quimioluminiscencia; equipo de inmunoblot; incubadora húmeda.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Portaobjetos con células HEp-2, con neutrófilos y con Crithidia luciliae; conjugados anti inmunoglobulina humana marcados con fluoresceína; kits de ELISA, quimioluminiscencia o inmunoblot para cada especificidad; sueros control positivos de patrón conocido y negativos; medio de montaje.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Cubreobjetos; cámaras húmedas; micropipetas; tubos de dilución; microplacas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Portaobjetos; conjugados; kits; controles.

Unidad

1 · título de la dilución (1:80, 1:160, 1:320 y siguientes) · patrón de fluorescencia con su código internacional · UI/mL o unidades arbitrarias en los inmunoensayos

Rango de referencia

Punto de corte usual del ANA en 1:80 sobre células HEp-2, con una prevalencia de positividad del 10 al 15 % en población sana que sube con la edad; títulos de 1:320 o más y ciertos patrones tienen valor clínico; anti ADN de doble cadena y anti Sm son muy específicos de lupus

Norma que lo exige

Las guías y los criterios de clasificación de las sociedades de reumatología (EULAR y ACR) para lupus, síndrome de Sjögren, esclerosis sistémica y vasculitis, que incorporan estos anticuerpos como criterios; las obras sociales y el sistema de medicamentos de alto costo, que exigen el resultado para autorizar tratamientos biológicos; los laboratorios se habilitan según la Ley 17.132; ISO 15189 y los programas de evaluación externa de la calidadnorma internacional

Norma que describe la técnica

Las recomendaciones del International Consensus on ANA Patterns para la nomenclatura y el informe de los patrones de inmunofluorescencia; el consenso internacional revisado sobre el ensayo de ANCA (Bossuyt y colaboradores, 2017), que recomienda el inmunoensayo específico como primera línea; las guías del Colegio Americano de Reumatología sobre el uso de ANA; ISO 15189norma internacional

Edición y vigencia de la norma

Consenso internacional de patrones ANA (ICAP, actualizado 2021); consenso revisado de ANCA (2017)

Volumen de muestra

1 a 2 mL de suero; se pide junto con el cuadro clínico, porque un ANA positivo sin síntomas no diagnostica nada

Conservación y transporte

El suero se conserva refrigerado hasta 72 horas y congelado para plazos mayores; los sueros lipémicos y hemolizados dan fondo en la inmunofluorescencia. La lectura del patrón exige un observador entrenado y control con sueros de patrón conocido en cada corrida, y la concordancia entre observadores es la limitación del método, por eso se informa con la nomenclatura internacional. Un ANA positivo aislado no es diagnóstico: se informa siempre con título, patrón y método, y se interpreta con la clínica y con los anticuerpos específicos.

Límite de detección típico

Título de 1:40 a 1:80 según el punto de corte del laboratorio

Incertidumbre típica

La titulación tiene una incertidumbre de una dilución (un factor de dos); los inmunoensayos tienen coeficientes de variación del 10 al 20 %

Área

Clínico/bioquímico; Biología molecular

Fecha de última actualización: 9/9/2026