Determinación de la actividad enzimática de detergentes para la limpieza de dispositivos médicos

Fundamento

En una central de esterilización, la limpieza no es un paso cosmético sino la condición que hace posible la esterilización: la materia orgánica residual —sangre, proteínas, restos de tejido— protege a los microorganismos del agente esterilizante y, en instrumental de lumen estrecho o de bisagras, es prácticamente imposible de remover por acción mecánica sola. Los detergentes enzimáticos resuelven eso incorporando enzimas que degradan específicamente esos residuos: proteasas que hidrolizan las proteínas de la sangre y del tejido, amilasas que degradan almidones, y lipasas que atacan las grasas. La eficacia del producto depende de que esas enzimas estén activas, y su actividad cae con el tiempo, con la temperatura de almacenamiento y con la exposición a la luz, de modo que un detergente vencido o mal guardado se ve igual y no limpia. Por eso la norma fija la determinación de la actividad, que es lo que permite verificar la especificación del fabricante en recepción y controlar la vida útil real en las condiciones del establecimiento. El método se apoya en el principio general de la enzimología aplicada: se hace reaccionar el producto, diluido a la concentración de uso y en las condiciones de temperatura y pH que declara el fabricante, con un sustrato específico de la enzima en cuestión, y se mide la velocidad a la que se forma el producto de reacción o desaparece el sustrato. Para las proteasas se usan sustratos proteicos que liberan un cromóforo al ser hidrolizados, o caseína cuya digestión se sigue por la aparición de péptidos solubles medidos por absorbancia; para las amilasas, almidón coloreado o sustratos sintéticos; para las lipasas, ésteres que liberan un producto medible. La actividad se expresa en unidades definidas por el propio método y se compara contra la declarada, lo que exige que las condiciones sean exactamente las especificadas, porque la actividad enzimática depende fuertemente del pH y de la temperatura.

Analito (qué se busca)

Proteasas, amilasas y lipasas del detergente

Matriz (en qué muestra)

Detergentes enzimáticos para la limpieza de dispositivos médicos; productos en recepción y en verificación de vida útil; soluciones de uso en centrales de esterilización; detergentes en registro de producto médico

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Espectrofotómetro ultravioleta-visible con control de temperatura de cubeta; baño termostático de precisión; medidor de pH; balanza analítica; micropipetas; cronómetro; agitador.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Sustratos específicos para cada actividad: sustratos proteicos cromogénicos o caseína, almidón o sustratos de amilasa, ésteres para lipasa; buffers de pH definido; enzimas patrón de actividad conocida para la verificación del método; reactivos de frenado de la reacción; agua ultrapura.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Cubetas; tubos de reacción termostatizados; planilla con las absorbancias en el tiempo, la pendiente y el cálculo de actividad; identificación del producto, del fabricante, del lote, de la fecha de vencimiento y de la actividad declarada; registro de las condiciones de almacenamiento del producto.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Sustratos; buffers; enzimas patrón; muestra.

Unidad

kat · actividad de proteasa, de amilasa y de lipasa en las unidades que fija el método · actividad declarada por el fabricante y porcentaje remanente · pH y temperatura de la reacción · concentración de uso ensayada · resultado de la enzima patrón de verificación · fecha de vencimiento y condiciones de almacenamiento del producto

Rango de referencia

La actividad depende mucho del pH y de la temperatura: medirla en condiciones distintas de las que declara el fabricante da un número que no se puede comparar con la especificación

Norma que lo exige

La reglamentación de productos médicos y el registro de detergentes para uso en establecimientos de salud; las normas de reprocesamiento de dispositivos médicos, que exigen validar y controlar la etapa de limpieza; los procedimientos de la central de esterilización y sus registros; los pliegos de compra hospitalarios; las normas de acreditación del laboratorionorma argentina

Norma que describe la técnica

IRAM 9038-1, Detergentes enzimáticos para la limpieza de dispositivos médicos. Parte 1 - Determinación de su actividad proteolítica y amilolítica. La norma IRAM de detergentes enzimáticos para la limpieza de dispositivos médicos, parte de determinación de su actividad, que fija los sustratos, las condiciones de reacción y la expresión del resultado; las normas internacionales de reprocesamiento de dispositivos médicos y de evaluación de la limpieza; los procedimientos validados del laboratorionorma argentina

Edición y vigencia de la norma

Norma IRAM de detergentes enzimáticos para la limpieza de dispositivos médicos, parte 1 de determinación de su actividad

Volumen de muestra

De 10 a 50 mL de producto

Conservación y transporte

El producto se conserva en su envase original, cerrado, al abrigo de la luz y a la temperatura que indica el fabricante, y se ensaya sin trasvasar: las enzimas se inactivan con la luz y con el calor, y una muestra fraccionada en otro envase puede perder actividad antes del ensayo.

Límite de detección típico

Depende del sustrato; los métodos resuelven caídas de actividad del orden del 5 %

Incertidumbre típica

Del 10 al 25 % relativo, propia de las determinaciones enzimáticas

Área

Clínico/bioquímico; Química analítica; Higiene y seguridad

Fecha de última actualización: 22/9/2026