Electroforesis y cromatografía de hemoglobinas para el estudio de talasemias y hemoglobinopatías

Fundamento

La hemoglobina del adulto es en más del 96 % hemoglobina A, con una pequeña fracción de hemoglobina A2 y trazas de hemoglobina fetal. En la beta talasemia menor, la producción de cadenas beta está disminuida y la hemoglobina A2 sube por encima del 3,5 %, que es el marcador diagnóstico; en la alfa talasemia el perfil es normal y el diagnóstico es molecular. Las variantes estructurales como la hemoglobina S de la anemia falciforme o la C tienen una carga distinta y se separan de la A. El estudio se hace por cromatografía líquida de intercambio catiónico, que es el método más usado porque separa y cuantifica en minutos las fracciones con muy buena resolución y da directamente el porcentaje de A2 y F, o por electroforesis capilar, o por electroforesis en acetato de celulosa a pH alcalino y en agar ácido, que se complementan porque variantes que migran juntas en un pH se separan en el otro. Toda variante detectada se confirma con un segundo método de principio distinto y, cuando hace falta precisión, por secuenciación de los genes de globina. El resultado se interpreta junto con el hemograma completo con índices hematimétricos, el recuento de reticulocitos y el estado del hierro, porque la ferropenia baja la hemoglobina A2 y puede enmascarar una beta talasemia; por eso el estudio se repite después de corregir el hierro cuando hay dudas. La prueba de falciformación y la de solubilidad son ensayos rápidos para la hemoglobina S, que no reemplazan al perfil completo.

Analito (qué se mide)

Hemoglobinas A, A2, F, S, C y otras variantes, y su porcentaje

Matriz (en qué muestra)

Sangre entera con EDTA

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Cromatógrafo líquido dedicado de intercambio catiónico para hemoglobinas, o sistema de electroforesis capilar; equipo de electroforesis en acetato de celulosa y en agar con densitómetro; centrífuga; contador hematológico para los índices.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Columnas y tampones del sistema cromatográfico; calibradores y controles de hemoglobinas A, A2, F y S; tampones de electroforesis alcalina y ácida; colorantes; reactivos de hemólisis; reactivos de falciformación y de solubilidad.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Tubos con EDTA; viales; portaobjetos; tiras de acetato.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Columnas; tampones; controles; tiras.

Unidad

% · % de cada fracción de hemoglobina sobre el total

Rango de referencia

Adulto normal: hemoglobina A mayor al 96 %, A2 de 2 a 3,3 % y F menor al 1 %; beta talasemia menor: A2 mayor a 3,5 %; portador de hemoglobina S: alrededor de 40 % de S con A predominante

Norma que lo exige

Las guías de diagnóstico de anemias del Ministerio de Salud y de la Sociedad Argentina de Hematología; los programas de pesquisa neonatal que incluyen hemoglobinopatías en algunas jurisdicciones; el asesoramiento genético prenupcial y preconcepcional en poblaciones de riesgo; Ley 17.132; ISO 15189norma internacional

Norma que describe la técnica

Las guías del Comité Británico de Estándares en Hematología para el diagnóstico de laboratorio de hemoglobinopatías; CLSI H62 para la evaluación de hemoglobinopatías; las recomendaciones de la Federación Internacional de Talasemia; las guías de la Sociedad Argentina de Hematología; ISO 15189norma internacional

Edición y vigencia de la norma

CLSI H62 (2023); guías del BCSH, vigentes

Volumen de muestra

3 a 5 mL de sangre entera con EDTA, con hemograma completo de la misma extracción

Conservación y transporte

La muestra se conserva refrigerada y se procesa dentro de la semana; una muestra vieja o hemolizada da picos de degradación que se confunden con variantes. El estudio no se hace dentro de los tres meses de una transfusión, porque se analiza la hemoglobina del donante y no la del paciente, y ese es el error de interpretación más frecuente. En un recién nacido predomina la hemoglobina fetal y el perfil se interpreta con las tablas de la edad. El informe tiene que decir el método usado y si la variante fue confirmada por un segundo método.

Límite de detección típico

0,2 a 0,5 % de una fracción minoritaria

Incertidumbre típica

±0,1 a 0,2 % en valor absoluto en la hemoglobina A2, que es lo que importa porque el punto de corte está en 3,5 %

Área

Clínico/bioquímico; Biología molecular

Fecha de última actualización: 9/9/2026