Ensayo cometa (electroforesis en gel de células individuales)

Fundamento

Las células embebidas en agarosa se lisan y se someten a electroforesis en condiciones alcalinas; los fragmentos de ADN dañado migran fuera del núcleo formando una "cola de cometa" cuya longitud e intensidad son proporcionales al daño.

Analito (qué se busca)

Daño en el ADN

Matriz (en qué muestra)

Células / sangre / organismos centinela

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Cuba de electroforesis horizontal refrigerada; microscopio de fluorescencia; software de análisis de imagen.

Proveedores de Biología molecular · Microscopía.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Agarosa de bajo punto de fusión; solución de lisis con Triton X-100 y DMSO; buffer alcalino pH >13; bromuro de etidio o SYBR Gold.

Proveedores de Reactivos y solventes.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Portaobjetos esmerilados; cubreobjetos; cámaras húmedas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Portaobjetos; agarosa; guantes.

Unidad

1 · % de ADN en la cola · Momento de cola · longitud de cola (µm)

Rango de referencia

Se comparan grupos expuesto y control

Edición y vigencia de la norma

Esta técnica no responde a una norma única: se aplica con procedimientos internos validados por cada laboratorio, o forma parte de un método más amplio que sí tiene norma. Si el resultado va a usarse con fines regulatorios o legales, hay que acordar de antemano el procedimiento y su validación.

Volumen de muestra

1 a 5 mL de sangre con heparina, o 10⁴ a 10⁵ células

Conservación y transporte

Refrigerar a 4 °C y procesar dentro de las 4 horas. Todo el procesamiento va en frío y en penumbra: la luz genera daño en el ADN y arruina el ensayo.

Límite de detección típico

Detecta unas 50 roturas por célula diploide

Incertidumbre típica

±20 a 30%: se cuentan 50 a 100 células por punto

Área

Toxicología

Fecha de última actualización: 3/9/2026

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