Estimación de la actividad enzimática en detergentes y control de su estabilidad en la formulación

Fundamento

La actividad se determina por ensayo cinético sobre un sustrato específico de cada enzima: las proteasas se miden sobre caseína o sobre sustratos sintéticos que liberan un producto coloreado o fluorescente al hidrolizarse, cuantificando la velocidad inicial de aparición del producto a pH y temperatura controlados; las amilasas, siguiendo la hidrólisis del almidón por la pérdida de color con yodo o con sustratos cromogénicos; las lipasas, por la liberación de ácidos grasos de un éster, medida por titulación o por espectrofotometría; y las celulasas, sobre derivados de la celulosa. El resultado se expresa en unidades de actividad por gramo de producto, definidas por el propio método y referidas a un patrón enzimático, motivo por el cual las unidades de distintos proveedores no son comparables entre sí salvo que se ensaye en paralelo. La matriz del detergente interfiere: los tensioactivos desnaturalizan y los blanqueadores oxidan, de modo que la extracción se hace en condiciones suaves y con el agregado de estabilizantes. El control de estabilidad se hace almacenando el producto en condiciones aceleradas de temperatura y humedad y midiendo la actividad remanente en el tiempo, que es el dato con el que se define la vida útil declarada.

Matriz (en qué muestra)

Detergentes en polvo y líquidos con enzimas; materias primas enzimáticas granuladas y líquidas; productos en estudio de estabilidad; formulaciones con blanqueadores oxidantes; muestras de control de recepción

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Espectrofotómetro con control de temperatura y lectura cinética; lector de microplacas; baño termostático; pH metro; cámara de estabilidad con control de temperatura y humedad; balanza analítica; agitadores.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Sustratos específicos de cada enzima; patrones enzimáticos de actividad certificada; soluciones reguladoras de pH; estabilizantes de extracción; reactivos de revelado.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Cubetas y microplacas; micropipetas; matraces; frascos de estabilidad; portamuestras.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Sustratos y patrones; microplacas; muestras.

Unidad

kat · actividad por enzima (unidades por gramo de producto) · patrón y método de referencia empleados · actividad remanente tras el almacenamiento acelerado (%) · condiciones de extracción y estabilizantes usados · pH y temperatura del ensayo

Rango de referencia

Las unidades de actividad son propias de cada método y de cada proveedor y no se convierten entre sí: la comparación exige ensayar las muestras y el patrón en la misma serie, y ese es el punto que más confusión genera al comparar ofertas de materias primas

Norma que lo exige

Las especificaciones de compra de materias primas enzimáticas, que se pagan por unidad de actividad; las normas de producto de detergentes que declaran acción enzimática; las normas de rotulado sobre atributos declarados y sobre vida útil; las normas de higiene y seguridad sobre manipulación de enzimas, que son sensibilizantes respiratorios y exigen control de polvonorma argentina

Norma que describe la técnica

IRAM 25613, que fija el método de estimación de la actividad de enzimas en detergentes sintéticos; las normas internacionales equivalentes sobre determinación de actividad de proteasas y amilasas en productos de limpieza; los métodos de los proveedores de enzimas, que definen sus propias unidades; las guías sobre ensayos de estabilidad aceleradanorma argentina

Edición y vigencia de la norma

IRAM 25613:1979

Volumen de muestra

Destructivo. De 1 a 10 g de producto por determinación

Conservación y transporte

La extracción se hace en frío y con la solución reguladora indicada, porque el propio proceso de análisis desactiva la enzima si se calienta o se agita de más, y el resultado sale bajo sin que nada lo delate. Las muestras se conservan cerradas y a temperatura controlada desde su recepción. Se corre un patrón enzimático en cada serie para verificar el sistema. El polvo de las materias primas enzimáticas se maneja con extracción y protección respiratoria por su capacidad sensibilizante.

Límite de detección típico

Los ensayos cinéticos detectan actividades muy por debajo de las declaradas en los productos comerciales

Incertidumbre típica

Del orden del 10 % en la actividad determinada, habitual en ensayos enzimáticos; se informa siempre el método y el patrón

Área

Química analítica; Materiales/industrial; Microbiología

Fecha de última actualización: 11/9/2026