Estudio de trombofilia y dosaje de factores de la coagulación

Fundamento

El plasma se obtiene con citrato de sodio en proporción exacta de una parte por nueve de sangre, por doble centrifugación para dejarlo con menos de diez mil plaquetas por microlitro, porque las plaquetas residuales liberan fosfolípidos al congelar y falsean las pruebas de anticoagulante lúpico. Los factores se dosan por método coagulométrico: se mezcla el plasma del paciente diluido con un plasma deficiente en el factor que se quiere medir y se hace el tiempo de protrombina o el tiempo de tromboplastina parcial activada según la vía, y la corrección del tiempo respecto de una curva con plasma de referencia da el porcentaje de actividad del factor. La antitrombina y las proteínas C y S se miden por métodos cromogénicos, en que el anticoagulante del paciente inhibe una enzima que libera un cromóforo, y por métodos inmunológicos para separar los déficits cuantitativos de los cualitativos; la proteína S se mide además en su fracción libre. La resistencia a la proteína C activada se detecta comparando el tiempo de coagulación con y sin proteína C activada agregada, y su causa más frecuente, el factor V Leiden, se confirma por genética molecular junto con la mutación de la protrombina. El anticoagulante lúpico se busca con al menos dos pruebas de principios distintos, el tiempo de veneno de víbora de Russell diluido y un tiempo de tromboplastina parcial sensible, siguiendo la secuencia de tamizaje, mezcla con plasma normal, que no corrige si hay inhibidor, y confirmación con exceso de fosfolípidos; se completa con los anticuerpos anticardiolipina y anti beta 2 glicoproteína I por inmunoensayo.

Matriz (en qué muestra)

Plasma citratado pobre en plaquetas; suero para los anticuerpos

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Coagulómetro automatizado con detección óptica o mecánica y canal cromogénico; centrífuga refrigerada; freezer a -70 grados; analizador de inmunoensayo; termociclador para las mutaciones.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Plasmas deficientes en cada factor; tromboplastina y reactivo de tiempo de tromboplastina parcial; sustratos cromogénicos y reactivos de antitrombina y proteínas C y S; veneno de víbora de Russell diluido; plasma normal de referencia; kits de anticuerpos antifosfolípidos; kits de genética de factor V Leiden y protrombina.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Tubos con citrato al 3,2 % llenados al enrase; tubos de plástico para alícuotas; puntas; viales de congelación.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Reactivos; plasmas deficientes; tubos; controles.

Unidad

% · % de actividad de factores y de anticoagulantes naturales · relación normalizada en las pruebas de anticoagulante lúpico · U/mL de anticuerpos antifosfolípidos

Rango de referencia

Rango normal de factores y de antitrombina de 70 a 130 %; hemofilia grave por debajo del 1 % de factor VIII o IX; déficits hereditarios de antitrombina y proteínas C y S entre el 30 y el 60 %

Norma que lo exige

Las guías de la Sociedad Argentina de Hematología y del Grupo Cooperativo Argentino de Hemostasia sobre estudio de trombofilia, que fijan a quién estudiar y cuándo; los criterios de clasificación del síndrome antifosfolípido; los programas de hemofilia del Ministerio de Salud y la Ley 27.552 sobre hemofilia y coagulopatías congénitas; ISO 15189norma internacional

Norma que describe la técnica

Las guías de la Sociedad Internacional de Trombosis y Hemostasia para la detección del anticoagulante lúpico y para el dosaje de factores; CLSI H21 para la toma y el manejo de muestras de coagulación y H47 y H48 para las pruebas de coagulación; los criterios de clasificación ACR/EULAR del síndrome antifosfolípido (2023); ISO 15189norma internacional

Edición y vigencia de la norma

Guías ISTH para anticoagulante lúpico (2020); CLSI H21-A5 (2008), vigente

Volumen de muestra

Dos a tres tubos de citrato de 2,7 mL llenados exactamente hasta la marca, procesados a plasma dentro de la hora

Conservación y transporte

El tubo tiene que llenarse hasta el enrase: un tubo a la mitad tiene el doble de citrato en proporción y alarga todos los tiempos. El plasma se separa por doble centrifugación y se congela a -70 grados en alícuotas si no se procesa en el día; congelar a -20 grados degrada el factor V y el VIII. El momento del estudio importa tanto como la técnica: los anticoagulantes orales bajan las proteínas C y S, la heparina interfiere con la antitrombina y con el anticoagulante lúpico, y la trombosis aguda y el embarazo cambian los valores, así que la trombofilia se estudia al menos tres meses después del evento y con el paciente sin anticoagulación o con la interpretación adecuada. Los déficits se confirman en una segunda muestra.

Límite de detección típico

1 % de actividad de factor en los métodos coagulométricos

Incertidumbre típica

±10 a 15 % en el dosaje de factores; mayor en actividades muy bajas, donde se usan diluciones adicionales

Área

Clínico/bioquímico; Biología molecular

Fecha de última actualización: 9/9/2026