Fosfatasa alcalina en suero por hidrólisis de p-nitrofenilfosfato

Fundamento

La fosfatasa alcalina es un grupo de enzimas que hidrolizan ésteres de fosfato a pH alcalino. La medición aprovecha un sustrato cromogénico incoloro, el p-nitrofenilfosfato: al perder el fosfato se convierte en p-nitrofenol, que en medio alcalino está desprotonado y es intensamente amarillo. El instrumento sigue entonces el aumento de absorbancia a 405 nanómetros a treinta y siete grados, en un tampón que además aporta un aceptor del grupo fosfato liberado, habitualmente un aminoalcohol como el dietanolamina o el 2-amino-2-metil-1-propanol, para que la reacción no se frene. La pendiente del aumento de color es proporcional a la actividad. El punto fino no es analítico sino interpretativo: el suero del adulto contiene isoenzimas de origen hepático, óseo, intestinal y, en el embarazo, placentario, y el método las mide todas juntas. Un valor alto en un adolescente en pleno crecimiento o en el tercer trimestre de un embarazo puede ser perfectamente normal, mientras que el mismo valor en un adulto sedentario obliga a buscar colestasis. Para separar el origen se recurre a la gamma-glutamil transferasa, que acompaña al componente hepático y no al óseo, o a la separación de isoenzimas por inactivación térmica o electroforesis. El resultado también depende del tampón del reactivo, de modo que no se comparan valores entre laboratorios con esquemas distintos.

Analito (qué se busca)

Fosfatasa alcalina

Matriz (en qué muestra)

Suero de pacientes en estudio de colestasis, de enfermedad ósea metabólica o de hiperparatiroidismo; control de crecimiento en pediatría

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Autoanalizador de química clínica con lectura cinética a 405 nm y cubeta termostatizada a treinta y siete grados; centrífuga.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Sustrato p-nitrofenilfosfato; tampón alcalino con aceptor de fosfato y con magnesio y cinc como cofactores; calibrador y controles de dos niveles.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Cubetas; micropipetas; copas de muestra.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Cubetas; puntas; reactivos y controles.

Unidad

kat · U/L · µkat/L

Rango de referencia

El valor de referencia depende de la edad y del embarazo: en el crecimiento y en el tercer trimestre es normalmente más alto. Ojo: el resultado depende del tampón del reactivo y no se compara entre laboratorios con esquemas distintos; el EDTA y el citrato quelan los cofactores y dan valores falsamente bajos, así que la muestra es suero y no plasma

Norma que lo exige

Las normas de acreditación del laboratorio clínico y los programas de control de calidad externo en química clínica

Norma que describe la técnica

Los métodos de referencia de la Federación Internacional de Química Clínica y Medicina de Laboratorio para las enzimas séricas; los insertos de los reactivos, que declaran el tampón empleado

Edición y vigencia de la norma

Métodos de referencia de la IFCC para enzimas en su edición vigente

Volumen de muestra

De 3 a 5 mL de sangre en tubo seco con gel separador, que dan de 1 a 2 mL de suero

Conservación y transporte

El suero se separa del coágulo dentro de las dos horas de la extracción; separado, aguanta refrigerado unos días y congelado a veinte grados bajo cero varias semanas. La hemólisis es el problema serio de la preanalítica: el glóbulo rojo libera contenido intracelular y falsea el resultado, así que una muestra visiblemente hemolizada se vuelve a extraer en lugar de informarse con una nota. El suero refrigerado puede aumentar algo su actividad al reactivarse la enzima, de modo que conviene medir el día de la extracción.

Límite de detección típico

La actividad medible arranca en el orden de la unidad por litro

Incertidumbre típica

Repetibilidad del orden de unas pocas unidades por ciento

Área

Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 1/10/2026

Ficha N.º 4040 · ¿Ves algo para corregir? Escribinos