Fragilidad osmótica eritrocitaria por incubación en soluciones salinas decrecientes

Fundamento

El glóbulo rojo normal es un disco bicóncavo, con bastante más membrana que la que necesitaría una esfera del mismo volumen; ese exceso de superficie es lo que le permite hincharse en un medio hipotónico antes de estallar. En la esferocitosis hereditaria y en otras alteraciones de las proteínas del citoesqueleto, el glóbulo pierde membrana y se vuelve esférico: como ya no le sobra superficie, se rompe con una caída de la tonicidad mucho menor. La prueba explota exactamente esa diferencia. Se enfrenta la sangre a una serie de soluciones de cloruro de sodio de concentración decreciente, desde una isotónica hasta agua, se deja llegar al equilibrio y se mide la hemoglobina liberada en el sobrenadante de cada tubo por fotometría, con el tubo de agua como cien por ciento de hemólisis. Con esos valores se construye una curva de hemólisis contra concentración salina y se la compara con la de un control normal procesado el mismo día: la curva del esferocito está desplazada hacia la izquierda, es decir, hemoliza a concentraciones más altas de sal. La variante incubada, que deja la sangre veinticuatro horas a treinta y siete grados antes de ensayar, aumenta mucho la sensibilidad porque agota las reservas de glucosa del glóbulo y exagera el defecto de membrana. En sentido inverso, la talasemia y la anemia ferropénica dan glóbulos con exceso relativo de superficie y desplazan la curva hacia la derecha, lo que hace que un paciente con las dos cosas pueda dar un resultado falsamente normal.

Analito (qué se busca)

Hemólisis eritrocitaria en función de la concentración salina

Matriz (en qué muestra)

Sangre entera con heparina o con EDTA de pacientes con anemia hemolítica de causa no aclarada; estudio familiar de esferocitosis hereditaria

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Espectrofotómetro o fotocolorímetro; centrífuga; baño termostatizado o estufa a treinta y siete grados; pipetas automáticas; agitador rotatorio suave.

Proveedores de Baños, agitación y homogeneización · Estufas, muflas y hornos · Espectrofotometría UV-Vis.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Solución madre de cloruro de sodio tamponada con fosfatos a pH 7,4; agua destilada; anticoagulante heparina o EDTA; sangre control normal fresca del mismo día.

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Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Muestra de sangre entera reciente; serie de tubos con las diluciones salinas; planilla con la curva de la muestra y la del control, la concentración de hemólisis inicial y la de hemólisis del cincuenta por ciento; datos del paciente: hemograma, reticulocitos, bilirrubina, antecedentes familiares, esplenectomía y transfusiones recientes.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Tubos; puntas de pipeta; reactivos de la serie salina.

Proveedores de Reactivos y solventes · Micropipetas y puntas.

Unidad

1 · porcentaje de hemólisis en cada concentración salina · concentración de hemólisis inicial y de hemólisis del cincuenta por ciento · curva comparada con el control normal del día · resultado de la variante incubada veinticuatro horas

Rango de referencia

Una transfusión reciente aporta glóbulos normales y disimula el defecto; y una ferropenia o una talasemia asociadas desplazan la curva en sentido contrario y pueden normalizar un resultado que no lo es

Norma que lo exige

Las guías de estudio de las anemias hemolíticas de las sociedades de hematología; los programas de control de calidad externo en hematología; las normas de acreditación del laboratorio clínico

Norma que describe la técnica

Los manuales de procedimientos de hematología de las sociedades científicas del área; los procedimientos del laboratorio, con su curva de referencia propia

Edición y vigencia de la norma

Procedimientos de hematología vigentes del laboratorio, con la curva de referencia establecida por el propio laboratorio

Volumen de muestra

De 2 a 5 mL de sangre entera anticoagulada

Conservación y transporte

Se procesa el mismo día, dentro de las seis horas si es posible; la sangre guardada pierde ATP y se vuelve más frágil por sí sola, lo que da falsos positivos. El control normal tiene que ser del mismo día y haber viajado y esperado lo mismo que la muestra, porque la comparación es contra él y no contra una tabla.

Límite de detección típico

No corresponde: el resultado es una curva comparada con un control

Incertidumbre típica

La concentración de hemólisis del cincuenta por ciento se repite dentro de unas centésimas de gramo por ciento de cloruro de sodio entre corridas

Área

Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 23/9/2026

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