Microscopía electrónica de transmisión en patología diagnóstica

Fundamento

El tejido exige una preparación distinta de la de rutina desde el primer minuto. Se fija en glutaraldehído tamponado, que preserva las membranas mucho mejor que el formol, en fragmentos de un milímetro cúbico, porque el fijador penetra poco; después se posfija en tetróxido de osmio, que da contraste a los lípidos de membrana y actúa como mordiente. Se deshidrata, se incluye en una resina epoxi que polimeriza por calor y se cortan secciones semifinas de menos de un micrómetro, que se colorean con azul de toluidina y sirven para orientar y elegir el área de interés. De esa área se cortan secciones ultrafinas de decenas de nanómetros con cuchilla de diamante en un ultramicrótomo, se recogen sobre grillas metálicas y se contrastan con acetato de uranilo y citrato de plomo. La observación se hace en el microscopio electrónico de transmisión, con imágenes a distintos aumentos y calibración de escala. En riñón se evalúan el espesor y la textura de la membrana basal, la disposición de los podocitos y la localización de los depósitos electrodensos; en el estudio ciliar se cuentan y describen los pares de microtúbulos y los brazos de dineína en cortes transversales de cilios, y se requiere un número mínimo de cilios evaluables para poder concluir.

Matriz (en qué muestra)

Biopsias renales; biopsias musculares y de nervio periférico; biopsias bronquiales y nasales para estudio ciliar; tumores de difícil clasificación; tejido con sospecha de enfermedad de depósito

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Microscopio electrónico de transmisión con cámara digital; ultramicrótomo con cuchilla de diamante; estufa de polimerización; campana de extracción para osmio; equipo de contrastado; microscopio óptico para las semifinas.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Glutaraldehído tamponado; tetróxido de osmio; alcoholes y óxido de propileno; resinas epoxi y endurecedores; acetato de uranilo y citrato de plomo; azul de toluidina.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Grillas de cobre; moldes de inclusión; cuchillas de vidrio y de diamante; portaobjetos; frascos de fijación de vidrio.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Resinas y fijadores; grillas; cuchillas; guantes; reactivos de contraste.

Unidad

m · espesor de la membrana basal (nm) · localización y densidad de los depósitos · porcentaje de borramiento podocitario · configuración de los microtúbulos y presencia de brazos de dineína · número de cilios o de glomérulos evaluables

Rango de referencia

El estudio renal requiere al menos uno o dos glomérulos en el bloque de resina para ser concluyente; el estudio ciliar exige un número mínimo de cortes transversales bien orientados

Norma que lo exige

Las guías de las sociedades de nefropatología y de patología neuromuscular, que establecen la microscopía electrónica como parte del estudio obligatorio de la biopsia renal y de determinadas biopsias musculares; los estándares de acreditación de laboratorios de patología; las normas de higiene y seguridad y de gestión de residuos por el uso de osmio, uranilo y plomo, que son tóxicos y en el caso del uranilo además radiactivo y sujeto a control

Norma que describe la técnica

Las guías de las sociedades de nefropatología sobre procesamiento y lectura de la biopsia renal; las recomendaciones internacionales sobre estudio ultraestructural del cilio y sus criterios de adecuación; los manuales de técnica de microscopía electrónica en patología

Edición y vigencia de la norma

Guías de nefropatología y de estudio ciliar vigentes; manuales de microscopía electrónica en patología vigentes

Volumen de muestra

Destructivo. Se necesita un fragmento de tejido dedicado, tomado y fijado por separado en el momento de la biopsia

Conservación y transporte

El fragmento para microscopía electrónica se separa y se fija en glutaraldehído en el mismo acto de la biopsia, en trozos muy pequeños y refrigerado: el tejido que pasó por formol pierde la ultraestructura y el que quedó en un fragmento grande se fija solo por fuera. Esa decisión se toma antes de saber el diagnóstico, así que en biopsias renales y musculares se separa siempre. El uranilo se maneja bajo el régimen de control que corresponde a un material radiactivo de baja actividad, con inventario, y el osmio en campana por su volatilidad y toxicidad. Los bloques de resina se archivan y permiten volver a cortar años después.

Límite de detección típico

Resuelve estructuras del orden de nanómetros, muy por debajo del límite de la microscopía óptica

Incertidumbre típica

La interpretación es morfológica; su confiabilidad depende de la representatividad del fragmento y del número de estructuras evaluables, que se informa

Área

Clínico/bioquímico; Nanotecnología

Fecha de última actualización: 10/9/2026