Panel respiratorio molecular multiplex por PCR en tiempo real

Fundamento

Las infecciones respiratorias agudas son clínicamente indistinguibles entre sí en la mayoría de los pacientes: la fiebre, la tos y la dificultad respiratoria no dicen qué agente las produce, y sin embargo la conducta cambia según el resultado —antiviral para influenza, aislamiento de contacto para sincicial, macrólido para las atípicas, notificación para varios de ellos—. El panel molecular multiplex resuelve eso amplificando en una sola reacción los ácidos nucleicos de muchos agentes a la vez. El procedimiento empieza por la extracción, que debe recuperar tanto ARN como ADN, porque en el mismo panel conviven virus de ARN, virus de ADN y bacterias; para los de ARN se incluye un paso de transcripción reversa. La amplificación se hace con múltiples pares de cebadores y sondas marcadas con fluoróforos distintos, diseñadas sobre regiones conservadas de cada agente; los sistemas que no alcanzan a separar todos los blancos por color los separan además por temperatura de fusión o por reacciones en compartimentos distintos dentro del mismo cartucho. Cada reacción lleva un control interno de amplificación, que se agrega a la muestra antes de extraer y que detecta tanto una extracción fallida como la presencia de inhibidores, frecuentes en muestras respiratorias con mucha mucosidad o sangre. La sensibilidad es alta, y eso trae su propia dificultad de interpretación: el panel detecta material genético, no virus viable, de modo que puede seguir dando positivo semanas después de una infección resuelta, y encuentra coinfecciones cuyo significado clínico no siempre está claro. La calidad de la toma vuelve a ser determinante: un hisopado nasal superficial en lugar de un nasofaríngeo baja mucho el rendimiento.

Analito (qué se busca)

Virus influenza A y B; virus sincicial respiratorio; SARS-CoV-2; adenovirus; metapneumovirus; rinovirus; parainfluenza; Mycoplasma pneumoniae; Bordetella pertussis

Matriz (en qué muestra)

Hisopado nasofaríngeo y aspirado nasofaríngeo de pacientes con infección respiratoria aguda; lavado broncoalveolar en pacientes graves e inmunocomprometidos; muestras de vigilancia epidemiológica

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Termociclador en tiempo real o plataforma cerrada de cartucho con extracción y amplificación integradas; extractor automático de ácidos nucleicos; campana de seguridad biológica clase II; centrífuga; micropipetas calibradas; áreas separadas para preparación de reactivos, de muestra y de amplificación.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Equipos comerciales de panel respiratorio multiplex con sus cebadores, sondas y mezcla de amplificación; reactivos de extracción de ácidos nucleicos; control interno de amplificación; controles positivos y negativos externos; medio de transporte viral; hisopos de dacrón o flocados con vástago de plástico.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Hisopado o aspirado nasofaríngeo en medio de transporte; planilla con el lote del equipo, los controles corridos, el control interno de cada muestra y los valores de ciclo umbral; datos: días de evolución, edad, comorbilidades, vacunación y contexto epidemiológico.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Equipos de extracción y de amplificación; cartuchos; hisopos; medio de transporte; puntas con filtro.

Unidad

Ninguna · detección o no detección de cada agente del panel · valor de ciclo umbral de cada blanco, como estimación semicuantitativa de carga · resultado del control interno de amplificación · coinfecciones detectadas · lote del equipo y controles de la corrida

Rango de referencia

Detecta material genético, no virus viable: puede seguir positivo semanas después de resuelta la infección. Y una coinfección detectada no siempre significa que los dos agentes estén causando el cuadro

Norma que lo exige

La vigilancia epidemiológica de las infecciones respiratorias agudas ante el sistema nacional de vigilancia de la salud, con notificación de los agentes de denuncia obligatoria; los protocolos de control de infecciones y de aislamiento hospitalario; los algoritmos de uso de antivirales; las normas de acreditación del laboratorio clínico

Norma que describe la técnica

Las instrucciones de uso del equipo comercial multiplex, con su lista de blancos y su desempeño declarado; los protocolos de la red nacional de laboratorios de virus respiratorios; los procedimientos del laboratorio

Edición y vigencia de la norma

Instrucciones de uso vigentes del equipo comercial de panel respiratorio, con la lista de blancos incluidos en la versión empleada

Volumen de muestra

De 1 a 3 mL de medio de transporte con el hisopado; de 2 a 5 mL de aspirado o de lavado

Conservación y transporte

La muestra va refrigerada a cuatro grados y se procesa dentro de las setenta y dos horas, o se congela a menos setenta grados si se demora más; se evitan los ciclos de congelado y descongelado, que degradan el ARN. El hisopado tiene que ser nasofaríngeo profundo: uno nasal superficial baja el rendimiento de manera apreciable.

Límite de detección típico

Del orden de 100 a 1.000 copias por mililitro según el blanco y la plataforma

Incertidumbre típica

No corresponde en sentido estricto: el resultado es cualitativo, con el ciclo umbral como referencia semicuantitativa

Área

Clínico/bioquímico; Biología molecular; Microbiología

Fecha de última actualización: 23/9/2026