Procesamiento histológico: fijación, inclusión en parafina, microtomía y coloración de rutina

Fundamento

El tejido se fija en formol tamponado al diez por ciento, que forma puentes de metileno entre las proteínas y detiene la autólisis conservando la arquitectura; el volumen de fijador debe ser varias veces el de la pieza y el tiempo tiene un mínimo y un máximo, porque poca fijación deja el centro autolizado y demasiada enmascara los antígenos. Después el tejido pasa por el procesador: deshidratación en alcoholes de graduación creciente, aclaramiento con xileno o un sustituto, e impregnación con parafina fundida al vacío, todo con tiempos y temperaturas programados. Se incluye en un bloque orientado según lo que haya que ver, se enfría y se corta en el micrótomo a espesores de tres a cinco micrómetros; las secciones se extienden en un baño de flotación tibio y se recogen sobre portaobjetos. La coloración de rutina con hematoxilina y eosina tiñe los núcleos de azul violáceo por la afinidad de la hematoxilina por la cromatina y el citoplasma y el colágeno de rosa por la eosina, y es la base sobre la que se hace el diagnóstico morfológico. El montaje con cubreobjetos y medio de índice de refracción adecuado cierra el proceso. Cada etapa tiene controles: temperatura del baño, filo y ángulo de la cuchilla, recambio de reactivos por número de ciclos y verificación diaria de la coloración con un corte control.

Matriz (en qué muestra)

Biopsias endoscópicas y por punción; piezas quirúrgicas; conos y resecciones; tejido de autopsia; material de necropsia; tejido para archivo institucional

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Procesador de tejidos por inmersión o al vacío; centro de inclusión con dispensador de parafina y placa fría; micrótomo rotatorio con enfriador de bloques; baño de flotación; estufa de secado de portaobjetos; coloreador y montador automáticos; campana de extracción para formol y xileno; microscopio.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Formol tamponado al 10 %; alcoholes de graduación creciente; xileno o sustituto; parafina histológica; hematoxilina y eosina; medio de montaje; agua destilada.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Casetes de inclusión; moldes; cuchillas desechables de micrótomo; portaobjetos y cubreobjetos; pinzas; frascos de reactivos.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Casetes, cuchillas y portaobjetos; reactivos y parafina; guantes; medio de montaje.

Unidad

m · tiempo de isquemia fría y tiempo de fijación (h) · espesor de corte (µm) · calidad de la coloración según escala interna · porcentaje de cortes a repetir · trazabilidad del casete al preparado

Rango de referencia

La fijación en formol se mantiene en general entre 6 y 48 horas para biopsias pequeñas y con tiempos mayores para piezas grandes; los cortes de rutina se hacen entre 3 y 5 µm

Norma que lo exige

Las normas de habilitación de servicios de anatomía patológica de las autoridades sanitarias, que fijan requisitos de equipamiento, procedimientos y archivo; las normas de higiene y seguridad por el uso de formol, clasificado como cancerígeno, y de xileno, con sus límites de exposición; los estándares de acreditación de laboratorios de patología; los plazos legales de conservación de tacos y preparados

Norma que describe la técnica

Los manuales de técnicas histológicas y los procedimientos normalizados de los colegios y sociedades de patología; las guías internacionales sobre variables preanalíticas en anatomía patológica; las normas de gestión de la calidad aplicadas al laboratorio de patología; los procedimientos validados del servicio

Edición y vigencia de la norma

Normas de habilitación de servicios de anatomía patológica vigentes; manuales de técnicas histológicas vigentes

Volumen de muestra

Destructivo para el tejido procesado, aunque el taco de parafina conserva el material y permite nuevos cortes por años

Conservación y transporte

El tiempo entre la extracción del tejido y su entrada al fijador es la variable más crítica y menos controlada: cada minuto de isquemia caliente degrada ácidos nucleicos y antígenos, así que el circuito con el quirófano se acuerda y se registra. La pieza se coloca en un volumen de formol suficiente y no se comprime dentro del frasco. Los tacos y los preparados se archivan por el plazo legal, protegidos del calor y de la humedad, porque son el respaldo del diagnóstico y la fuente de material para estudios futuros. El formol y el xileno se manipulan en campana y se gestionan como residuos peligrosos.

Límite de detección típico

No aplica: es un proceso de preparación de la muestra

Incertidumbre típica

No aplica; la calidad se controla con criterios morfológicos sobre cortes control y con la revisión sistemática de los preparados rechazados

Área

Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 10/9/2026