Prueba de antiglobulina directa y estudio de las anemias inmunohemolíticas

Fundamento

La prueba de antiglobulina directa detecta inmunoglobulinas o fracciones del complemento ya fijadas sobre los glóbulos rojos del paciente in vivo, a diferencia de la indirecta, que busca anticuerpos libres en el suero. Los glóbulos se lavan a fondo para eliminar todo el plasma, y luego se enfrentan con suero antiglobulina poliespecífico; si aglutinan, la prueba es positiva y se repite con reactivos monoespecíficos anti inmunoglobulina G y anti complemento, porque el patrón orienta al mecanismo: solo inmunoglobulina G sugiere una hemólisis por anticuerpos calientes, solo complemento sugiere anticuerpos fríos, y ambos aparecen en formas mixtas. El estudio continúa con el eluido, que despega los anticuerpos de los glóbulos por acidificación o por calor y permite identificar su especificidad en un panel, dato clave para distinguir un autoanticuerpo de un aloanticuerpo por transfusión reciente. En paralelo se estudia el suero por técnica indirecta, se determina el título y la amplitud térmica de los anticuerpos fríos, y se completa con los marcadores de hemólisis: hemoglobina, reticulocitos, bilirrubina indirecta, deshidrogenasa láctica y haptoglobina. En el recién nacido la prueba positiva con un anticuerpo materno identificado confirma la enfermedad hemolítica.

Matriz (en qué muestra)

Sangre de pacientes con anemia y sospecha de hemólisis; recién nacidos con ictericia; pacientes con reacción transfusional; pacientes bajo tratamiento con fármacos asociados a hemólisis; muestras derivadas de otros servicios

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Sistema de tarjetas de gel con centrífuga e incubadora; centrífuga serológica; lavador de células; baño a treinta y siete grados y heladera para las fases frías; espectrofotómetro o analizador para los marcadores de hemólisis; microscopio.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Suero antiglobulina poliespecífico y monoespecífico anti inmunoglobulina G y anti complemento; reactivos de elución ácida o por calor; paneles de identificación; solución de lavado; células control.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Tarjetas de gel; tubos; micropipetas; gradillas; baño de hielo.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Reactivos y paneles; tarjetas; puntas de pipeta; guantes.

Unidad

1 · prueba directa positiva o negativa e intensidad · patrón monoespecífico · especificidad del eluido · título y amplitud térmica de anticuerpos fríos · marcadores de hemólisis

Rango de referencia

El resultado es categórico y se interpreta junto con la clínica: una prueba positiva sin hemólisis se observa en personas sanas y en varias enfermedades, así que por sí sola no diagnostica

Norma que lo exige

Las normas técnicas nacionales de hemoterapia sobre estudios inmunohematológicos; los protocolos de investigación de reacciones transfusionales, que exigen esta prueba; las guías de diagnóstico de anemias hemolíticas de las sociedades de hematología; los protocolos de seguimiento del recién nacido ictérico

Norma que describe la técnica

Las normas técnicas nacionales de hemoterapia y los estándares internacionales de bancos de sangre sobre prueba de antiglobulina directa, elución y estudio de autoanticuerpos; los manuales técnicos de inmunohematología; las guías clínicas de anemias hemolíticas autoinmunes

Edición y vigencia de la norma

Normas técnicas nacionales de hemoterapia vigentes; estándares internacionales de bancos de sangre vigentes

Volumen de muestra

Destructivo en la porción usada. De 6 a 10 mL de sangre con anticoagulante y un tubo sin anticoagulante

Conservación y transporte

La muestra se toma con anticoagulante que quele el calcio para evitar la fijación de complemento in vitro, que da falsos positivos. Los estudios de anticuerpos fríos exigen mantener la muestra a treinta y siete grados desde la extracción hasta la separación, porque si se enfría el anticuerpo se pega a los glóbulos en el tubo y altera todo el estudio; eso se coordina de antemano con quien extrae. El lavado de los glóbulos debe ser completo, ya que un resto de plasma neutraliza el suero antiglobulina y da falsos negativos, motivo por el cual se corren células control en toda prueba negativa.

Límite de detección típico

La prueba detecta unas pocas centenas de moléculas de inmunoglobulina por glóbulo rojo; por debajo de eso se usan técnicas de mayor sensibilidad

Incertidumbre típica

Categórico, con el control de células sensibilizadas como garantía de validez de los resultados negativos

Área

Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 10/9/2026