Validación de anticuerpos y control de calidad de la inmunohistoquímica diagnóstica

Fundamento

La validación de un anticuerpo nuevo consiste en demostrar que en las condiciones del laboratorio marca lo que tiene que marcar y no marca lo que no. Se ensaya sobre un número definido de casos con expresión conocida, positivos y negativos, comparando contra un método de referencia o contra el diagnóstico establecido, y se ajustan las variables: método de recuperación antigénica —por calor en solución amortiguadora a pH definido o por digestión enzimática—, dilución del anticuerpo, tiempo de incubación y sistema de detección. Se fija así el protocolo y se documenta. En el uso diario, cada corrida lleva controles: un control positivo externo de reactividad conocida, un control negativo de reactivo en el que se omite el anticuerpo primario para descartar marcación inespecífica del sistema de detección, y los controles internos del propio tejido, que son las estructuras normales que deben marcar y cuya ausencia delata una corrida fallida aunque el tumor no marque. Los bloques control multitejido, con decenas de cilindros de tejidos distintos en un solo taco, permiten controlar muchos anticuerpos con poco material. El laboratorio participa además de programas de evaluación externa que envían material ciego y comparan resultados entre laboratorios.

Matriz (en qué muestra)

Cortes de tejido en parafina; bloques control multitejido; anticuerpos primarios nuevos y de lote nuevo; plataformas de tinción automatizada; material de programas de evaluación externa

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Plataforma automatizada de tinción inmunohistoquímica; olla a presión o baño para recuperación antigénica; micrótomo; estufa; microscopio con cámara; equipo para armar bloques multitejido; sistema de análisis de imagen o escáner de preparados.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Anticuerpos primarios; sistemas de detección con polímero y cromógeno; soluciones de recuperación antigénica de distinto pH; peróxido para bloqueo de peroxidasa endógena; hematoxilina de contraste; medios de montaje.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Portaobjetos cargados electrostáticamente; bloques control multitejido; cubetas; pinzas; planillas de validación.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Anticuerpos y sistemas de detección; portaobjetos; guantes; reactivos de recuperación.

Unidad

1 · concordancia con el método de referencia (%) · protocolo fijado: recuperación, dilución y tiempo · resultado de los controles por corrida · desempeño en la evaluación externa · lote y clon del anticuerpo

Rango de referencia

Las guías exigen concordancias altas frente al método de referencia, en general por encima del 90 %, sobre un número mínimo de casos que depende de si el marcador es predictivo o solo diagnóstico

Norma que lo exige

Las normas de habilitación de servicios de anatomía patológica y los estándares de acreditación de laboratorios de patología, que exigen validación documentada de cada anticuerpo, controles en cada corrida y participación en evaluación externa; las guías de las sociedades de patología sobre control de calidad en inmunohistoquímica; las disposiciones de la autoridad regulatoria sobre productos de diagnóstico in vitro

Norma que describe la técnica

Las guías de las sociedades internacionales de patología sobre validación de ensayos inmunohistoquímicos, con el número mínimo de casos y los criterios de concordancia; los estándares de acreditación de laboratorios de patología; los programas de evaluación externa de calidad en inmunohistoquímica; las instrucciones de uso de cada anticuerpo

Edición y vigencia de la norma

Guías internacionales de validación en inmunohistoquímica vigentes; estándares de acreditación de laboratorios de patología vigentes

Volumen de muestra

Destructivo en los cortes usados; la validación consume material de varios casos y del bloque control

Conservación y transporte

Los cortes para inmunohistoquímica se hacen sobre portaobjetos cargados y se colorean pronto: las secciones guardadas pierden antigenicidad, sobre todo en los marcadores predictivos, y por eso las guías desaconsejan cortar por anticipado y guardar. Los anticuerpos se conservan a la temperatura de su ficha, sin congelar y descongelar, y cada lote nuevo se verifica contra el anterior antes de ponerlo en uso. Se registran fijación y tiempo de isquemia del caso, porque un resultado negativo en un tejido mal fijado no es un negativo verdadero. Los controles de cada corrida se archivan junto con el caso.

Límite de detección típico

No aplica: es una técnica de localización con lectura semicuantitativa

Incertidumbre típica

La variabilidad entre laboratorios es la razón de ser de los programas de evaluación externa; la reproducibilidad interna se sostiene en el protocolo fijo y en los controles

Área

Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 10/9/2026