Virus influenza A y B por PCR en tiempo real

Fundamento

El blanco es un genoma de ARN, así que la reacción empieza por una transcripción inversa que lo pasa a ADN; después se amplifica una región conservada con cebadores propios del agente y una sonda marcada que emite fluorescencia a medida que el producto se acumula. El ciclo en el que esa señal supera el umbral es el valor que se informa: cuanto más bajo, más material genético había. Cada muestra lleva un control interno que viaja con ella desde la extracción; si ese control falla, el negativo no vale y hay que repetir. En el formato multiplex varios blancos comparten la misma reacción, distinguidos por el color de cada sonda, lo que permite cubrir el panel entero con una sola muestra y en una sola corrida.

Analito (qué se busca)

Virus influenza A y B

Matriz (en qué muestra)

Hisopado nasofaríngeo y aspirado nasofaríngeo de pacientes con infección respiratoria aguda; lavado broncoalveolar en pacientes graves e inmunocomprometidos; muestras de vigilancia epidemiológica

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Termociclador en tiempo real o plataforma cerrada de cartucho con extracción y amplificación integradas; extractor automático de ácidos nucleicos; campana de seguridad biológica clase II; centrífuga; micropipetas calibradas; áreas separadas para preparación de reactivos, de muestra y de amplificación.

Proveedores de Reactivos y solventes · Micropipetas y puntas · Centrífugas.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Equipo comercial de panel respiratorio multiplex con sus cebadores, sondas y mezcla de amplificación; reactivos de extracción de ácidos nucleicos; control interno de amplificación; controles positivo y negativo; medio de transporte viral.

Proveedores de Reactivos y solventes.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Hisopado o aspirado nasofaríngeo en medio de transporte; planilla con el lote del equipo, los controles corridos, el control interno de cada muestra y los valores de ciclo umbral; datos: días de evolución, edad, comorbilidades, vacunación y contexto epidemiológico.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Equipos de extracción y de amplificación; cartuchos; hisopos; medio de transporte; puntas con filtro.

Proveedores de Micropipetas y puntas.

Unidad

Ninguna · detección o no detección de cada agente del panel · valor de ciclo umbral de cada blanco, como estimación semicuantitativa de carga · resultado del control interno de amplificación · coinfecciones detectadas · lote del equipo y controles de la corrida

Rango de referencia

Un resultado positivo con síntomas de pocos días sostiene el diagnóstico y la indicación de antiviral, que sirve sobre todo en las primeras 48 horas. La PCR detecta material genético y no virus viable: puede seguir positiva días después de resuelto el cuadro

Norma que lo exige

La vigilancia epidemiológica de las infecciones respiratorias agudas ante el sistema nacional de vigilancia de la salud, con notificación de los agentes de denuncia obligatoria; los protocolos de control de infecciones y de aislamiento hospitalario; los algoritmos de uso de antivirales; las normas de acreditación del laboratorio clínico

Norma que describe la técnica

Las instrucciones de uso del equipo comercial multiplex, con su lista de blancos y su desempeño declarado; los protocolos de la red nacional de laboratorios de virus respiratorios; los procedimientos del laboratorio

Edición y vigencia de la norma

Instrucciones de uso vigentes del equipo comercial de panel respiratorio, con la lista de blancos incluidos en la versión empleada

Volumen de muestra

De 1 a 3 mL de medio de transporte con el hisopado; de 2 a 5 mL de aspirado o de lavado

Conservación y transporte

La muestra va refrigerada a cuatro grados y se procesa dentro de las setenta y dos horas, o se congela a menos setenta grados si se demora más; se evitan los ciclos de congelado y descongelado, que degradan el ARN. El hisopado tiene que ser nasofaríngeo profundo: uno nasal superficial baja el rendimiento de manera apreciable.

Límite de detección típico

Del orden de 100 a 1.000 copias por mililitro según el blanco y la plataforma

Incertidumbre típica

No corresponde en sentido estricto: el resultado es cualitativo, con el ciclo umbral como referencia semicuantitativa

Área

Clínico/bioquímico; Biología molecular; Microbiología

Fecha de última actualización: 1/10/2026

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