Conteo de fotones individuales correlacionado en el tiempo (TCSPC)

Fundamento

Un pulso láser excita la muestra y se mide el tiempo hasta la llegada del primer fotón emitido; repitiendo millones de veces se construye el histograma de decaimiento, cuyo ajuste exponencial da el tiempo de vida.

Matriz (en qué muestra)

Muestra fluorescente

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Fluorómetro con láser o LED pulsado; detector rápido (SPAD/PMT); módulo TCSPC.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Patrones de tiempo de vida; solventes espectroscópicos.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Cubetas de cuarzo.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Ninguno específico.

Unidad

s · ns · ps

Rango de referencia

Típico 0,1-20 ns para fluoróforos orgánicos

Norma que describe la técnica

Sin norma única; ver guías IUPAC de fluorescencia

Edición y vigencia de la norma

Esta técnica no responde a una norma única: se aplica con procedimientos internos validados por cada laboratorio, o forma parte de un método más amplio que sí tiene norma. Si el resultado va a usarse con fines regulatorios o legales, hay que acordar de antemano el procedimiento y su validación.

Volumen de muestra

50 a 200 µL de solución diluida en cubeta de fluorescencia

Conservación y transporte

Vial ámbar refrigerado, protegido de la luz. La concentración tiene que ser baja para que no haya reabsorción de la fluorescencia, que distorsiona el decaimiento.

Límite de detección típico

10 a 50 ps de resolución temporal

Incertidumbre típica

±2 a 5% en el tiempo de vida; el ajuste multiexponencial agrega su propia ambigüedad

Área

Química analítica; Biología molecular; Ingeniería

Fecha de última actualización: 3/9/2026