Determinación de la inhibición de la emisión de luz de bacterias luminiscentes

Fundamento

La bacteria marina Vibrio fischeri emite luz de manera natural como producto de una reacción enzimática ligada de manera estrecha a su cadena respiratoria, de modo que cualquier sustancia que interfiera con su metabolismo reduce la emisión de luz de forma inmediata y proporcional. Esa propiedad convierte a la bacteria en un sensor de toxicidad general: se expone una suspensión de bacterias reactivadas a una serie de diluciones de la muestra, se mide la luminiscencia antes y después de un tiempo de contacto corto —del orden de minutos—, y la reducción porcentual respecto de un control da la inhibición, de la que se calcula la concentración que produce el efecto en la mitad de la respuesta. Sus ventajas son decisivas para un programa de vigilancia: entrega resultados en minutos en lugar de días, requiere volúmenes pequeños, es muy reproducible y el reactivo bacteriano liofilizado se conserva y se estandariza, lo que elimina la variabilidad de mantener un cultivo de organismos superiores. Su limitación es la contraparte: mide un efecto sobre una bacteria y no sobre un organismo del ecosistema receptor, de modo que su correlación con la toxicidad para peces o invertebrados es buena pero no universal, y por eso se usa como tamizaje y las decisiones regulatorias se apoyan en los ensayos con las especies que la norma prescribe.

Matriz (en qué muestra)

Efluentes industriales y lixiviados; aguas superficiales y subterráneas; extractos de suelo y de sedimento; sustancias en tamizaje de toxicidad; muestras de programas de vigilancia con muchas determinaciones

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Luminómetro con control de temperatura y bloque de incubación; pipetas de precisión; refrigerador y congelador para el reactivo bacteriano; pH-metro y conductímetro; equipo de ajuste de salinidad; cronómetro.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Reactivo bacteriano liofilizado con su medio de reactivación; solución de ajuste de salinidad; sustancia de referencia de toxicidad conocida; agua de dilución; reactivos de ajuste de pH.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Cubetas de luminómetro; planillas de luminiscencia por dilución y por tiempo; curvas de inhibición archivadas; identificación de la muestra, del punto y de la fecha de toma.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Reactivo bacteriano; cubetas; muestra.

Unidad

1 · porcentaje de inhibición de la luminiscencia por dilución y por tiempo de contacto · concentración de efecto en la mitad de la respuesta y su intervalo de confianza · corrección por el factor de color y turbidez de la muestra · resultado del control con sustancia de referencia · pH y salinidad ajustados de la muestra

Rango de referencia

El ensayo mide el efecto sobre una bacteria y su correlación con la toxicidad para organismos superiores es buena pero no universal, de modo que sirve muy bien para tamizar y ordenar muestras y no reemplaza al ensayo con la especie que la reglamentación prescribe para la decisión final

Norma que lo exige

Las reglamentaciones de vuelco de efluentes que admiten este ensayo como método de evaluación de toxicidad; los programas de vigilancia ambiental con gran cantidad de puntos; los protocolos de tamizaje de sustancias y de caracterización de lixiviados; las normas de acreditación del laboratorionorma argentina

Norma que describe la técnica

IRAM 29115, que fija la determinación de la inhibición de la emisión de luz de Vibrio fischeri; IRAM 29112, sobre la determinación de la toxicidad letal aguda en organismos acuáticos; IRAM 29129, sobre la determinación de efectos tóxicos en sedimentos y muestras sólidas; IRAM 29012-16, sobre la guía para el bioensayo de muestras de aguanorma argentina

Edición y vigencia de la norma

IRAM 29115:2010; IRAM 29112:2010; IRAM 29129:2010; IRAM 29012-16:2010

Volumen de muestra

No destructivo para la fuente. De 10 a 100 mL de muestra

Conservación y transporte

Las muestras coloreadas o turbias exigen la corrección por absorción de luz que prevé el método, porque el color atenúa la luminiscencia y se contabiliza como inhibición: un efluente oscuro y no tóxico puede informar una toxicidad alta que es puramente óptica. La salinidad y el pH se ajustan a los valores prescriptos, dado que la bacteria es marina y responde a ambos.

Límite de detección típico

El ensayo detecta inhibiciones desde alrededor del 5 %

Incertidumbre típica

Del 10 al 25 % en la concentración de efecto

Área

Toxicología; Efluentes; Microbiología

Fecha de última actualización: 11/9/2026