Detección y cuantificación de virus de abejas por reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa

Fundamento

Los virus de las abejas son en su mayoría de ácido ribonucleico, de modo que la detección requiere primero una transcripción inversa a ácido desoxirribonucleico complementario y luego la amplificación por reacción en cadena de la polimerasa, en formato convencional para detección o en tiempo real para cuantificar la carga viral relativa, normalizada contra genes de referencia de la abeja. Se analizan conjuntos de abejas, en general de decenas de individuos, porque la carga es muy heterogénea entre individuos y un análisis individual no representa a la colonia. La interpretación es cuantitativa y no binaria: casi todas las colonias tienen algunos de estos virus en carga baja sin manifestación clínica, y lo que distingue a una colonia enferma es una carga varios órdenes de magnitud mayor, de modo que informar solo presencia o ausencia es de poca utilidad. La detección en varroa recogida de la colmena aporta información sobre el papel del ácaro como vector en ese apiario. La secuenciación de los productos permite identificar variantes, información relevante porque algunas variantes del virus de las alas deformes se asocian con mucha más mortalidad que otras. El análisis se complementa con la observación clínica de alas deformes, de abejas temblorosas y de cría con síntomas.

Analito (qué se mide)

Virus de las alas deformes, de la parálisis aguda, de la realera negra y demás virus de abejas

Matriz (en qué muestra)

Abejas adultas con síntomas y sin síntomas; pupas y larvas; varroa recogida de las colmenas; colonias con despoblamiento invernal; material de reinas y de núcleos en comercialización

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Equipo de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real con transcripción inversa; homogeneizador de tejidos; centrífuga refrigerada; espectrofotómetro de ácidos nucleicos; congelador de ultrabaja temperatura; cabina de extracción; equipo de secuenciación o acceso a servicio.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Reactivos de extracción de ácido ribonucleico; enzimas de transcripción inversa y mezclas de amplificación; cebadores y sondas de cada virus; controles positivos y de proceso; agua libre de nucleasas.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Tubos y puntas con filtro; morteros y perlas de homogeneización; hielo seco; frascos de muestreo; congelador de transporte.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Reactivos y enzimas; tubos y puntas; muestras de abejas.

Unidad

1 · virus detectados y su carga relativa · número de abejas por conjunto analizado · carga en varroa cuando se analiza · variante identificada por secuenciación · signos clínicos observados en la colonia

Rango de referencia

La carga viral en colonias sanas y en colonias colapsadas puede diferir en varios órdenes de magnitud para el mismo virus, y por eso el resultado se informa de manera cuantitativa y siempre con la referencia de normalización empleada

Norma que lo exige

Las normas del organismo nacional de sanidad animal sobre vigilancia sanitaria apícola y sobre requisitos para el movimiento y la exportación de material vivo; los programas de investigación y de vigilancia de la salud de las colmenas; los requisitos sanitarios de los criaderos de reinas; las certificaciones de buenas prácticas apícolas

Norma que describe la técnica

Los manuales de la organización mundial de sanidad animal sobre enfermedades virales de las abejas; las guías internacionales normalizadas de métodos de investigación en virus de abejas, con los protocolos de extracción, los cebadores y los criterios de cuantificación; las guías sobre normalización de la carga viral con genes de referencia

Edición y vigencia de la norma

Guías internacionales de métodos de investigación en virus de abejas vigentes

Volumen de muestra

Destructivo. Decenas de abejas por conjunto analizado

Conservación y transporte

El ácido ribonucleico se degrada muy rápido: las muestras se congelan en el momento del muestreo, se transportan en frío sin romper la cadena y se procesan lo antes posible, o se conservan en un preservante específico; una muestra que viajó a temperatura ambiente da resultados falsos negativos. Se analizan conjuntos y no individuos aislados. Se incluyen controles de proceso en cada tanda para detectar inhibición, frecuente en extractos de abeja. Los resultados se informan con la fecha del muestreo, dado que la carga varía mucho a lo largo del año.

Límite de detección típico

La reacción en tiempo real detecta cargas muy bajas, del orden de pocas copias por reacción

Incertidumbre típica

Del orden de un factor de dos a tres en la cuantificación relativa; la heterogeneidad entre abejas es la fuente dominante

Área

Veterinaria; Biología molecular; Producción animal

Fecha de última actualización: 10/9/2026