Diagnóstico de rabia por inmunofluorescencia directa, prueba biológica y RT-PCR

Fundamento

La prueba de referencia sigue siendo la inmunofluorescencia directa sobre improntas de encéfalo. Se toman muestras de asta de Ammon, cerebelo y bulbo, se hacen improntas en portaobjetos, se fijan en acetona fría y se tratan con un conjugado de anticuerpos antirrábicos marcados con isotiocianato de fluoresceína; al microscopio de fluorescencia, los cuerpos de inclusión aparecen como acúmulos verde manzana dentro de las neuronas. Cuando la inmunofluorescencia es negativa pero el antecedente es fuerte, se confirma por aislamiento: la prueba biológica en ratón lactante, hoy en retroceso, o el cultivo en células de neuroblastoma murino, que da resultado en cuatro días en lugar de veintiocho. La RT-PCR en tiempo real detecta el genoma viral y permite además tipificar la variante, lo que dice si el ciclo es canino, de murciélago insectívoro o de vampiro, dato clave para orientar el control.

Matriz (en qué muestra)

Encéfalo de animales sospechosos; murciélagos; saliva

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Microscopio de fluorescencia; cabina de seguridad biológica clase II; criostato o equipamiento de improntas; termociclador en tiempo real; incubadora de cultivo celular.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Conjugado antirrábico fluorescente; acetona fría; línea celular de neuroblastoma; kits de extracción de ARN; sondas y cebadores para lisavirus.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Portaobjetos; cajas de transporte con refrigerantes; instrumental de necropsia descartable.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Conjugado; reactivos de PCR; elementos de protección personal.

Unidad

Presencia o ausencia · Ct en RT-PCR · variante antigénica o genética identificada

Rango de referencia

Resultado positivo o negativo. La tipificación informa la variante: 1 canina, 3 de vampiro, 4 y 6 de murciélagos insectívoros

Norma que lo exige

Ley 22.953 de control de la rabia y su reglamentación, Ley 27.233 de sanidad animal y vegetal y su Decreto reglamentario; resoluciones del SENASA que declaran la enfermedad de denuncia obligatoria y fijan el procedimiento ante un caso sospechoso; normativa del Ministerio de Salud para la profilaxis post-exposición en personasnorma argentina

Norma que describe la técnica

Manual de Pruebas de Diagnóstico y Vacunas para los Animales Terrestres de la Organización Mundial de Sanidad Animal (WOAH, ex OIE), capítulo de rabia; protocolos de la OPS y del Instituto Pasteur para la red de laboratorios de rabianorma argentina

Edición y vigencia de la norma

Manual Terrestre WOAH, edición vigente

Volumen de muestra

Encéfalo completo o, como mínimo, porciones de asta de Ammon, cerebelo y bulbo raquídeo

Conservación y transporte

La muestra viaja refrigerada, nunca en formol: el fijador destruye la reactividad del antígeno y la inmunofluorescencia deja de servir, con lo que la única muestra disponible se pierde. Es material de riesgo biológico y se manipula con protección y personal vacunado. Si el encéfalo llegó autolisado, la inmunofluorescencia pierde sensibilidad y hay que ir a la RT-PCR.

Límite de detección típico

La RT-PCR detecta desde unas pocas copias de genoma; la inmunofluorescencia requiere carga antigénica mayor

Incertidumbre típica

Sensibilidad de la inmunofluorescencia cercana al 99 % en muestra fresca de sistema nervioso; cae marcadamente con la autólisis

Área

Veterinaria; Microbiología; Biología molecular

Fecha de última actualización: 9/9/2026