Generación de especies reactivas de oxígeno por nanomateriales, acelular y celular

Fundamento

En el ensayo acelular se enfrenta la nanopartícula a una sonda fluorescente que se oxida —diclorofluoresceína o terephtalato— y se sigue el aumento de fluorescencia, con y sin iluminación, porque muchos óxidos son fotocatalíticos. En el ensayo celular se cargan las células con la sonda antes de exponerlas, y el aumento de fluorescencia intracelular mide el estrés oxidativo real, con controles del efecto óptico de las propias partículas.

Analito (qué se mide)

Generación de especies reactivas de oxígeno

Matriz (en qué muestra)

Nanopartículas; nanomateriales fotocatalíticos

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Lector de microplacas con fluorescencia; fuente de luz ultravioleta o simulador solar para los fotocatalíticos; incubadora; citómetro de flujo como alternativa.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Sondas fluorescentes DCFH-DA o terephtalato de sodio; peróxido de hidrógeno como control positivo; antioxidantes como control negativo; medio de cultivo.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Microplacas negras de fondo transparente; puntas; viales ámbar.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Sondas fluorescentes, sensibles a la luz.

Unidad

Unidades relativas de fluorescencia · Veces de aumento sobre el control · pendiente de generación por minuto

Rango de referencia

El dióxido de titanio en fase anatasa bajo luz ultravioleta genera órdenes de magnitud más especies reactivas que el mismo material en oscuridad

Norma que lo exige

No hay todavía una norma argentina específica para nanomateriales: la obligación surge de la norma del producto que los contiene. La referencia metodológica es la serie ISO/TC 229 de nanotecnologíasnorma internacional

Norma que describe la técnica

ISO/TS 19006 (ensayo de especies reactivas de oxígeno con DCFH para nanomateriales); ISO/TR 19057 sobre uso de ensayos in vitronorma internacional

Edición y vigencia de la norma

ISO/TS 19006:2016, vigente

Volumen de muestra

10 a 30 mg de nanomaterial

Conservación y transporte

Las nanopartículas fluorescen o apagan la fluorescencia por sí solas, así que el control sin sonda y el control sin partícula son obligatorios y se descuentan. Todo se trabaja en penumbra: la sonda se oxida con la luz ambiente y da un aumento que parece del material. Para los fotocatalíticos hay que declarar la irradiancia y el espectro de la fuente, porque el resultado depende enteramente de eso.

Límite de detección típico

Depende de la sonda; el control es el que fija el piso

Incertidumbre típica

±25 a 40%; es un ensayo comparativo dentro de una misma tanda y no un valor absoluto

Área

Nanotecnología; Toxicología; Química analítica

Fecha de última actualización: 8/9/2026