Citotoxicidad de nanomateriales in vitro con controles de interferencia

Fundamento

Se exponen cultivos celulares a una serie de concentraciones del nanomaterial y se mide la viabilidad por reducción de una sal de tetrazolio, por liberación de lactato deshidrogenasa o por incorporación de rojo neutro. Lo específico del ensayo con nanopartículas son los controles de interferencia: las partículas absorben luz a la longitud de onda de lectura, adsorben el colorante y algunas reducen el tetrazolio por sí solas, así que se corren controles sin células que descuentan cada uno de esos efectos.

Matriz (en qué muestra)

Nanopartículas; nanomateriales en suspensión

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Cabina de flujo laminar; incubadora de CO₂; lector de microplacas; microscopio invertido; baño ultrasónico con sonda para la dispersión.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Líneas celulares de referencia; medio de cultivo con suero; sales de tetrazolio (MTT o WST); rojo neutro; kit de lactato deshidrogenasa; dispersante compatible.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Microplacas de 96 pocillos; puntas estériles; frascos de cultivo.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Medios y sueros; kits de viabilidad.

Unidad

% de viabilidad celular · CI50 en µg/mL · µg/cm² de dosis por superficie

Rango de referencia

Se considera citotóxico si la viabilidad cae por debajo del 70% respecto del control, según el criterio de ISO 10993-5

Norma que lo exige

No hay todavía una norma argentina específica para nanomateriales: la obligación surge de la norma del producto que los contiene. La referencia metodológica es la serie ISO/TC 229 de nanotecnologías. Para productos médicos rige ISO 10993 incorporada por la ANMATargentina e internacional

Norma que describe la técnica

ISO 19007 (ensayo MTS de citotoxicidad in vitro de nanomateriales); ISO/TR 19057; ISO 10993-5 como referencia general de citotoxicidadargentina e internacional

Edición y vigencia de la norma

ISO 19007:2018, vigente

Volumen de muestra

10 a 50 mg de nanomaterial, o 5 a 10 mL de suspensión concentrada

Conservación y transporte

La dosis se expresa también por unidad de superficie y no solo por concentración: las nanopartículas sedimentan sobre las células y lo que importa es cuánta superficie llega al fondo del pocillo, que depende de la densidad y del tamaño. La dispersión se hace con un protocolo escrito de sonicación —energía y tiempo declarados—, porque el estado de agregación es parte del material que se está ensayando y sonicar distinto es ensayar otra cosa.

Límite de detección típico

1 µg/mL

Incertidumbre típica

±20 a 30%; sin los controles de interferencia el resultado puede estar equivocado en cualquier dirección

Área

Nanotecnología; Toxicología; Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 8/9/2026