Detección y cuantificación de virus de la realera negra por reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa

Fundamento

Se homogeneiza un conjunto de decenas de abejas —nunca una sola, porque la carga varía muchísimo entre individuos—, se extrae el ácido ribonucleico y se lo retrotranscribe y amplifica en tiempo real con cebadores y sonda propios del virus. El resultado es una carga relativa, no un sí o un no: casi todas las colmenas tienen algo de estos virus, y lo que distingue a una colmena enferma es cuánto.

Analito (qué se busca)

Virus de la realera negra

Matriz (en qué muestra)

Abejas adultas con síntomas y sin síntomas; pupas y larvas; varroa recogida de las colmenas; colonias con despoblamiento invernal; material de reinas y de núcleos en comercialización

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Equipo de reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real con transcripción inversa; homogeneizador de tejidos; centrífuga refrigerada; espectrofotómetro de ácidos nucleicos; congelador de ultrabaja temperatura; cabina de extracción.

Proveedores de Baños, agitación y homogeneización · Espectrofotometría UV-Vis · Centrífugas.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Reactivos de extracción de ácido ribonucleico; enzimas y mezclas de amplificación; cebadores y sonda del virus de la realera negra; controles positivos y de proceso.

Proveedores de Reactivos y solventes.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Tubos y puntas con filtro; morteros y perlas de homogeneización; hielo seco y congelador de transporte; frascos de muestreo con la identificación de la colmena y la fecha.

Proveedores de Micropipetas y puntas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Reactivos y enzimas; tubos y puntas; muestras de abejas.

Proveedores de Reactivos y solventes · Micropipetas y puntas.

Unidad

1/m³ · virus detectados y su carga relativa · número de abejas por conjunto analizado · carga en varroa cuando se analiza · variante identificada por secuenciación · signos clínicos observados en la colonia

Rango de referencia

Se informa como carga relativa; interesa sobre todo en larvas y pupas de celdas reales

Norma que lo exige

Las normas del organismo nacional de sanidad animal sobre vigilancia sanitaria apícola y sobre requisitos para el movimiento y la exportación de material vivo; los programas de investigación y de vigilancia de la salud de las colmenas; los requisitos sanitarios de los criaderos de reinas; las certificaciones de buenas prácticas apícolas

Norma que describe la técnica

Los manuales de la organización mundial de sanidad animal sobre enfermedades virales de las abejas; las guías internacionales normalizadas de métodos de investigación en virus de abejas, con los protocolos de extracción, los cebadores y los criterios de cuantificación; las guías sobre normalización de la carga viral con genes de referencia

Edición y vigencia de la norma

Guías internacionales de métodos de investigación en virus de abejas vigentes

Volumen de muestra

Destructivo. Decenas de abejas por conjunto analizado

Conservación y transporte

El ácido ribonucleico se degrada muy rápido: las muestras se congelan en el momento del muestreo, se transportan en frío sin romper la cadena y se procesan lo antes posible, o se conservan en un preservante específico; una muestra que viajó a temperatura ambiente da resultados falsos negativos. Se analizan conjuntos y no individuos aislados. Se incluyen controles de proceso en cada tanda para detectar inhibición, frecuente en extractos de abeja. Los resultados se informan con la fecha del muestreo, dado que la carga varía mucho a lo largo del año.

Límite de detección típico

La reacción en tiempo real detecta cargas muy bajas, del orden de pocas copias por reacción

Incertidumbre típica

Del orden de un factor de dos a tres en la cuantificación relativa; la heterogeneidad entre abejas es la fuente dominante

Área

Veterinaria; Biología molecular; Producción animal

Fecha de última actualización: 1/10/2026

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