Diagnóstico y vigilancia de encefalopatías espongiformes transmisibles por inmunoensayo rápido, inmunohistoquímica y western blot

Fundamento

El agente de estas enfermedades es una proteína priónica del propio animal que adopta una conformación anómala y resistente a las proteasas, y que se acumula en el sistema nervioso central. El diagnóstico se apoya en detectar esa forma resistente. Se toma el tronco encefálico a la altura del óbex, que es la zona donde la proteína se acumula primero y en mayor cantidad, con una cuchara de muestreo por el agujero occipital sin abrir el cráneo. Las pruebas rápidas de tamizaje, que son las que se usan en volumen en la vigilancia, homogeneizan el tejido, lo digieren con proteinasa K, que destruye la proteína normal y deja intacta la resistente, y la detectan por inmunoensayo tipo ELISA o por inmunocromatografía en pocas horas. Toda muestra reactiva pasa a las pruebas confirmatorias en el laboratorio de referencia: el western blot, que además del resultado da el perfil de bandas, que distingue los tipos de la enfermedad, y la inmunohistoquímica sobre cortes fijados, que muestra el depósito de la proteína en el tejido con su patrón característico. La histopatología clásica busca la vacuolización espongiforme de las neuronas y del neuropilo, que da nombre a la enfermedad. En el diagnóstico diferencial de un bovino con signos nerviosos se descartan además la rabia, que se procesa siempre primero por su riesgo para las personas, la listeriosis y las intoxicaciones.

Analito (qué se busca)

Proteína priónica resistente a proteasas

Matriz (en qué muestra)

Tronco encefálico de bovinos, ovinos y caprinos; sistema nervioso central de animales con signos nerviosos; muestras del programa de vigilancia

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Cabina de seguridad biológica; homogeneizador de tejidos; lector de ELISA o de inmunocromatografía; equipo de western blot con transferencia y detección quimioluminiscente; procesador de tejidos, micrótomo y equipo de inmunohistoquímica; microscopio; autoclave de descontaminación; freezer.

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Reactivos¿Dónde lo compro?

Kits rápidos de tamizaje aprobados; proteinasa K; anticuerpos monoclonales contra la proteína priónica; controles positivos y negativos de referencia; formol tamponado; ácido fórmico para la inactivación de los cortes.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Cucharas de muestreo de óbex de un solo uso; frascos con formol y frascos para congelado; elementos de protección personal; recipientes de residuos patogénicos.

Proveedores de Seguridad y protección.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Kits; anticuerpos; cucharas; material descartable.

Unidad

Ninguna · reactivo o no reactivo en el tamizaje · patrón de bandas del western blot · presencia y patrón del depósito en inmunohistoquímica

Rango de referencia

Los programas de vigilancia analizan miles de muestras por año de bovinos de riesgo mayores a determinada edad; el objetivo es cero casos confirmados, y un reactivo en tamizaje se confirma o se descarta en el laboratorio de referencia

Norma que lo exige

Las resoluciones del SENASA que establecen el programa nacional de vigilancia de encefalopatías espongiformes transmisibles, con el muestreo obligatorio de las categorías de riesgo y la notificación inmediata; el Código Terrestre de la Organización Mundial de Sanidad Animal y el procedimiento de reconocimiento de estatus sanitario; las prohibiciones de uso de harinas de carne y hueso en la alimentación de rumiantes; los requisitos de los mercados importadoresnorma argentina

Norma que describe la técnica

El Manual de Pruebas de Diagnóstico y Vacunas para los Animales Terrestres de la Organización Mundial de Sanidad Animal, capítulo de encefalopatías espongiformes; los protocolos del laboratorio de referencia del SENASA; los kits rápidos evaluados y aprobados por la OMSA; las guías de bioseguridad para el manejo de material con prionesnorma argentina

Edición y vigencia de la norma

Manual Terrestre de la OMSA, edición 2024

Volumen de muestra

Una porción de tronco encefálico a la altura del óbex, en general de 2 a 5 g, dividida en una fracción congelada y otra en formol

Conservación y transporte

La muestra tiene que incluir el óbex: un tronco encefálico tomado más adelante puede dar negativo en un animal enfermo, y esa es la causa principal de muestras no aptas en los programas de vigilancia. Se toma sin abrir el cráneo, con la cuchara y por el agujero occipital, con el animal identificado y con los datos de edad y categoría, sin los cuales la muestra no cuenta para el programa. El material es de riesgo y se maneja con procedimientos específicos: los priones resisten la autoclave común y la descontaminación exige hidróxido de sodio o ciclos reforzados. La notificación de un reactivo es inmediata a la autoridad.

Límite de detección típico

Los kits rápidos aprobados detectan la proteína en el estadio en que el animal manifiesta signos y varios meses antes

Incertidumbre típica

Sensibilidad y especificidad de los kits evaluadas y publicadas por la OMSA; todo reactivo se confirma por dos técnicas independientes

Área

Veterinaria; Biología molecular; Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 10/9/2026

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