Ensayo de citotoxicidad in vitro y caracterización de nanopartículas en cámaras de exposición

Fundamento

La evaluación toxicológica de nanomateriales enfrenta dificultades que los ensayos convencionales no previeron. El ensayo de citotoxicidad in vitro por reducción de una sal de tetrazolio mide la viabilidad celular a partir de la actividad metabólica: las células vivas reducen el reactivo a un producto coloreado cuya absorbancia es proporcional a su número, de modo que una caída de señal indica muerte o inhibición. Aplicado a nanomateriales tiene interferencias específicas y bien documentadas: las nanopartículas pueden adsorber el colorante, pueden absorber luz a la longitud de onda de lectura, y algunas —los nanotubos de carbono en particular— reducen el reactivo por sí mismas sin intervención celular, generando falsos resultados en ambas direcciones; por eso el método exige controles sin células con el nanomaterial solo, que el ensayo clásico no incluye. Además la dosis no se describe bien por la concentración en masa, porque a igual masa el número de partículas y la superficie disponible cambian de manera enorme con el tamaño, y son esas magnitudes las que se correlacionan con el efecto. La caracterización de nanopartículas en cámaras de exposición por inhalación aborda el otro extremo: describir qué respira efectivamente el animal o el trabajador, en número, masa y distribución de tamaños, que es la información sin la cual ningún estudio de inhalación es interpretable.

Matriz (en qué muestra)

Nanopartículas metálicas y de óxidos metálicos; nanotubos de carbono y nanofibras; nanomateriales en productos de consumo y en cosméticos; nanomateriales en desarrollo con evaluación de riesgo; atmósferas de cámaras de exposición por inhalación

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Lector de microplacas con control de temperatura y de dióxido de carbono; cabina de seguridad biológica y estufa de cultivo; equipo de dispersión de nanomateriales en medio de cultivo; contador de partículas y espectrómetro de movilidad eléctrica para cámaras de exposición; impactadores en cascada; microscopio invertido.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Sales de tetrazolio y reactivos del ensayo de viabilidad; medios de cultivo y líneas celulares; suero y suplementos; controles positivos y negativos de citotoxicidad; medios de dispersión con proteínas.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Microplacas y material estéril; planillas de absorbancia con controles sin células; caracterización del material dispersado; identificación del nanomaterial, del lote y de la línea celular.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Medios y reactivos; microplacas; líneas celulares; muestra.

Unidad

1 · viabilidad celular por concentración y concentración inhibitoria media · dosis expresada en masa, en superficie y en número de partículas · resultado de los controles sin células con el nanomaterial solo · caracterización del material dispersado en el medio de cultivo · en cámaras de exposición, concentración en número y masa y distribución de tamaños

Rango de referencia

La dosis expresada en masa no describe bien la exposición a nanomateriales: a igual masa, un material más fino aporta muchas más partículas y mucha más superficie, que son las magnitudes que se correlacionan con el efecto; por eso el informe expresa la dosis de las tres maneras y no solo en concentración

Norma que lo exige

Las reglamentaciones sobre nanomateriales en productos de consumo y en cosméticos, que exigen evaluación de seguridad; los requisitos de higiene y seguridad laboral en instalaciones que manipulan nanomateriales; los protocolos de evaluación de riesgo de nanomateriales en desarrollo; las normas de acreditación del laboratorioargentina e internacional

Norma que describe la técnica

IRAM 39511, que fija el ensayo MTS de toxicidad in vitro para la evaluación del efecto citotóxico de nanomateriales; IRAM 39544, sobre la caracterización de nanopartículas en cámaras de exposición por inhalación; IRAM 39510, sobre la matriz de técnicas de medición para la caracterización de nanoobjetos; IRAM-ISO TR 11360, sobre la clasificación y categorización de nanomaterialesargentina e internacional

Edición y vigencia de la norma

IRAM 39511:2022; IRAM 39544:2022; IRAM 39510:2022; IRAM-ISO TR 11360:2022

Volumen de muestra

Destructivo. De microgramos a miligramos de nanomaterial por ensayo

Conservación y transporte

Se incluyen siempre controles con el nanomaterial y sin células, porque muchos nanomateriales interfieren con el reactivo del ensayo —lo adsorben, lo reducen o absorben a la longitud de onda de lectura— y sin ese control el resultado puede ser un artefacto completo. El material se caracteriza dispersado en el medio de cultivo, dado que allí se aglomera de manera distinta que en agua.

Límite de detección típico

El ensayo detecta reducciones de viabilidad desde alrededor del 10 %

Incertidumbre típica

Del 15 al 30 % en la concentración inhibitoria media, con dispersión propia de los ensayos celulares

Área

Nanotecnología; Toxicología; Higiene y seguridad

Fecha de última actualización: 11/9/2026