Evaluación de genotoxicidad ambiental por ensayo de aberraciones cromosómicas in vitro

Fundamento

La toxicidad aguda y la genotoxicidad son efectos independientes: una muestra puede no matar a ningún organismo en el ensayo agudo y contener sustancias capaces de dañar el material genético, con consecuencias que se manifiestan a largo plazo como carcinogénesis o como efectos sobre la descendencia. El ensayo de aberraciones cromosómicas in vitro detecta ese daño de manera directa: se exponen células en cultivo a la muestra o a su extracto, se las deja avanzar hasta la metafase, se las bloquea en esa etapa con un inhibidor del huso, se preparan extendidos y se examinan los cromosomas al microscopio buscando alteraciones estructurales —roturas, fragmentos, intercambios, figuras multirradiales— cuya frecuencia se compara con la de un control. El ensayo se corre con y sin activación metabólica mediante una fracción de hígado, porque muchos genotóxicos no lo son por sí mismos sino que requieren ser transformados por el metabolismo, y sin esa activación el ensayo daría negativo sobre una sustancia peligrosa; esa doble condición es la parte del método que más se omite y la que más falsos negativos produce. La lectura es microscópica y depende de un observador entrenado, con conteo de una cantidad prescripta de metafases por condición y con criterios definidos para clasificar cada aberración.

Matriz (en qué muestra)

Efluentes industriales complejos; aguas superficiales receptoras; extractos de suelo y de sedimento de sitios contaminados; sustancias en evaluación de peligrosidad; lixiviados de vertedero

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Cabina de seguridad biológica y estufa de cultivo con dióxido de carbono; centrífuga; microscopio óptico con objetivo de inmersión y contador; baño termostático; equipo de preparación de extendidos; congelador para la fracción metabólica.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Líneas celulares y medios de cultivo con suero; fracción de hígado para la activación metabólica con su sistema generador de cofactores; inhibidor del huso mitótico; solución hipotónica y fijador; colorantes de cromosomas; controles positivos con y sin activación.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Portaobjetos con extendidos identificados; planillas de recuento de aberraciones por condición; fotomicrografías de las aberraciones relevantes; identificación de la muestra y de su preparación.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Medios, reactivos y líneas celulares; portaobjetos; muestra.

Unidad

1 · frecuencia de células con aberraciones estructurales por condición, con y sin activación metabólica · tipos de aberración observados y su distribución · índice mitótico como indicador de citotoxicidad concurrente · resultado de los controles positivo y negativo de cada condición · cantidad de metafases analizadas por condición

Rango de referencia

El ensayo se corre siempre con y sin activación metabólica, porque muchos genotóxicos requieren transformación hepática para actuar y sin esa fracción el resultado sale negativo sobre una sustancia peligrosa: es la fuente de falsos negativos más importante y la que más veces se omite por costo

Norma que lo exige

Los protocolos de evaluación de peligrosidad de sustancias y de efluentes; las reglamentaciones sobre registro de productos químicos; los estudios de riesgo ambiental de sitios contaminados; las normas de acreditación del laboratorionorma argentina

Norma que describe la técnica

IRAM 29127, que fija la evaluación de genotoxicidad por el ensayo de aberraciones cromosómicas in vitro; IRAM 29112, sobre la determinación de la toxicidad letal aguda en organismos acuáticos; IRAM 29115, sobre la inhibición de la emisión de luz de Vibrio fischeri; IRAM 29129, sobre la determinación de efectos tóxicos en muestras sólidasnorma argentina

Edición y vigencia de la norma

IRAM 29127:2010; IRAM 29112:2010; IRAM 29115:2010; IRAM 29129:2010

Volumen de muestra

Destructivo. De microlitros a mililitros de muestra o de extracto

Conservación y transporte

El índice mitótico se evalúa junto con las aberraciones, porque una concentración demasiado citotóxica detiene la división celular y deja pocas metafases para contar: un resultado sin aberraciones sobre un cultivo casi detenido no significa ausencia de genotoxicidad sino que la concentración fue excesiva. La lectura la hace personal entrenado con criterios documentados.

Límite de detección típico

El ensayo detecta aumentos de frecuencia de aberraciones desde pocos puntos porcentuales sobre el control

Incertidumbre típica

La significación se establece por vía estadística sobre la cantidad de metafases analizadas

Área

Toxicología; Biología molecular; Ambiental

Fecha de última actualización: 11/9/2026