Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis por ELISA, cultivo y PCR en tiempo real

Fundamento

Ninguna de las tres pruebas alcanza por sí sola y cada una responde a una etapa distinta de la infección. El ELISA detecta anticuerpos y es barato y rápido, pero solo se positiviza tarde, cuando el animal ya elimina bacilos: sirve para estimar prevalencia y para encontrar los eliminadores fuertes, no para descartar. El cultivo en medio con micobactina, sobre materia fecal descontaminada, es la prueba de referencia por su especificidad, pero el organismo crece muy lento y hay que esperar de ocho a dieciséis semanas. La PCR en tiempo real dirigida a la secuencia de inserción IS900, sobre materia fecal o leche, da resultado en un día y detecta al eliminador aunque todavía no tenga anticuerpos; su límite es que también amplifica ADN de bacilos muertos, de modo que un positivo aislado en un ambiente contaminado hay que interpretarlo con cuidado.

Analito (qué se busca)

Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis

Matriz (en qué muestra)

Materia fecal; suero bovino, ovino y caprino; leche; tejido intestinal

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Lector de microplacas; termociclador en tiempo real; estufa de cultivo a 37 °C con capacidad de mantener los tubos meses; cabina de seguridad biológica.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Kits de ELISA con preadsorción para Mycobacterium phlei; medio Herrold con yema de huevo y micobactina; reactivos de descontaminación; kits de extracción de ADN y sondas IS900.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Tubos de cultivo con tapa a rosca; frascos colectores de materia fecal; microplacas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Kits; medios; reactivos de extracción.

Unidad

1 · Relación muestra/positivo (S/P) en ELISA · Ct en PCR · UFC por gramo en cultivo

Rango de referencia

ELISA: punto de corte según el kit, en general S/P mayor a 0,25 o 0,45. La prevalencia en tambos de la pampa húmeda se estima entre 10 y 30 % de establecimientos con animales positivos

Norma que lo exige

Ley 27.233 de sanidad animal y vegetal y su Decreto reglamentario; resoluciones del SENASA sobre control voluntario de paratuberculosis y sobre condiciones sanitarias para el movimiento de animales de cabañas; protocolos de certificación de establecimientos libresnorma argentina

Norma que describe la técnica

Manual de Pruebas de Diagnóstico y Vacunas para los Animales Terrestres de la Organización Mundial de Sanidad Animal (WOAH, ex OIE), capítulo de paratuberculosis (enfermedad de Johne); guías de la International Association for Paratuberculosisnorma argentina

Edición y vigencia de la norma

Manual Terrestre WOAH, edición vigente

Volumen de muestra

10 g de materia fecal del recto; 5 mL de sangre sin anticoagulante; 40 mL de leche individual

Conservación y transporte

La prueba se interpreta a nivel de rodeo y no de animal: con una sensibilidad individual que puede ser de 15 a 50 % en animales subclínicos, un negativo no libera al animal. Las muestras de materia fecal se refrigeran y se procesan pronto, o se congelan a -20 °C; el cultivo exige una descontaminación bien calibrada, porque si es suave crecen contaminantes y si es agresiva se mata también al bacilo, que ya de por sí es frágil.

Límite de detección típico

PCR: del orden de 100 organismos por gramo de materia fecal. Cultivo: menor, pero con meses de espera

Incertidumbre típica

Sensibilidad del ELISA de 15 a 30 % en subclínicos y superior al 85 % en clínicos; especificidad mayor a 98 % con preadsorción

Área

Veterinaria; Microbiología; Biología molecular

Fecha de última actualización: 1/10/2026

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