Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis por ELISA, cultivo y PCR en tiempo real

Fundamento

La materia fecal se descontamina y se siembra en medio Herrold con yema de huevo y micobactina, y se incuba hasta dieciséis semanas: es de las bacterias más lentas que se cultivan. La amplificación en tiempo real de la secuencia IS900 da respuesta en un día y detecta al animal que elimina el bacilo sin estar enfermo.

Analito (qué se busca)

Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis

Matriz (en qué muestra)

Materia fecal; suero bovino, ovino y caprino; leche; tejido intestinal

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Lector de microplacas; termociclador en tiempo real; estufa de cultivo a 37 °C con capacidad de mantener los tubos durante meses; cabina de seguridad biológica.

Proveedores de Estufas, muflas y hornos · Biología molecular.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Medio Herrold con yema de huevo y micobactina; reactivos de descontaminación; kits de extracción de ADN; sondas y cebadores de IS900; controles.

Proveedores de Reactivos y solventes.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Tubos de cultivo con tapa a rosca; frascos colectores de materia fecal; microplacas; registro del animal, su edad y su estado clínico.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Kits; medios; reactivos de extracción.

Proveedores de Reactivos y solventes.

Unidad

1 · Relación muestra/positivo (S/P) en ELISA · Ct en PCR · UFC por gramo en cultivo

Rango de referencia

La eliminación es intermitente: un resultado negativo no descarta y por eso los muestreos se repiten en el tiempo

Norma que lo exige

Ley 27.233 de sanidad animal y vegetal y su Decreto reglamentario; resoluciones del SENASA sobre control voluntario de paratuberculosis y sobre condiciones sanitarias para el movimiento de animales de cabañas; protocolos de certificación de establecimientos libresnorma argentina

Norma que describe la técnica

Manual de Pruebas de Diagnóstico y Vacunas para los Animales Terrestres de la Organización Mundial de Sanidad Animal (WOAH, ex OIE), capítulo de paratuberculosis (enfermedad de Johne); guías de la International Association for Paratuberculosisnorma argentina

Edición y vigencia de la norma

Manual Terrestre WOAH, edición vigente

Volumen de muestra

10 g de materia fecal del recto; 5 mL de sangre sin anticoagulante; 40 mL de leche individual

Conservación y transporte

La prueba se interpreta a nivel de rodeo y no de animal: con una sensibilidad individual que puede ser de 15 a 50 % en animales subclínicos, un negativo no libera al animal. Las muestras de materia fecal se refrigeran y se procesan pronto, o se congelan a -20 °C; el cultivo exige una descontaminación bien calibrada, porque si es suave crecen contaminantes y si es agresiva se mata también al bacilo, que ya de por sí es frágil.

Límite de detección típico

PCR: del orden de 100 organismos por gramo de materia fecal. Cultivo: menor, pero con meses de espera

Incertidumbre típica

Sensibilidad del ELISA de 15 a 30 % en subclínicos y superior al 85 % en clínicos; especificidad mayor a 98 % con preadsorción

Área

Veterinaria; Microbiología; Biología molecular

Fecha de última actualización: 1/10/2026

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