Agregados insolubles en biofármacos por exclusión molecular y dispersión de luz

Fundamento

Acá la exclusión molecular ya no sirve: estas partículas no entran en la columna. Se las cuenta por oscurecimiento de luz, que da número y tamaño sin decir qué son, y por imagen de flujo, que fotografía cada partícula y permite distinguir un agregado proteico de una fibra o de una burbuja. La inspección visual completa el rango más grueso.

Analito (qué se busca)

Agregados insolubles

Matriz (en qué muestra)

Anticuerpos monoclonales y proteínas de fusión; proteínas recombinantes terapéuticas; formulaciones liofilizadas y líquidas; muestras de estabilidad y de estrés; graneles y producto terminado; biosimilares en desarrollo

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Contador de partículas subvisibles por oscurecimiento de luz; equipo de imagen de flujo; cabina de inspección visual con fondo claro y oscuro; microscopio.

Proveedores de Microscopía.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Patrones de conteo de partículas de tamaño certificado; agua libre de partículas; material de referencia del producto.

Proveedores de Patrones y materiales de referencia.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Columnas de exclusión; celdas de dispersión; celdas de ultracentrífuga; viales libres de partículas; jeringas y filtros validados.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Fases móviles y patrones; columnas; viales; guantes; filtros.

Unidad

kg/kg · monómero, dímero y agregados (% del área) · masa molar absoluta de cada especie (kDa) · índice de polidispersidad · partículas por mililitro por rango de tamaño · morfología de las partículas contadas

Rango de referencia

Los límites de partículas subvisibles los fija la farmacopea para inyectables; la fracción proteica se evalúa además contra el historial del producto

Norma que lo exige

Las disposiciones de la autoridad regulatoria sobre productos biotecnológicos y sobre su expediente de registro; la Farmacopea Argentina en sus capítulos de partículas en inyectables y de métodos cromatográficos; las guías internacionales armonizadas sobre especificaciones y sobre estabilidad de productos biotecnológicos; las guías sobre inmunogenicidad y sobre partículas subvisibles en productos proteicosnorma argentina

Norma que describe la técnica

Los capítulos de las farmacopeas de referencia sobre cromatografía de exclusión molecular, sobre partículas subvisibles en inyectables y sobre métodos para agregados en productos proteicos; las guías internacionales armonizadas sobre pruebas de especificaciones de productos biotecnológicos; las guías de las agencias sobre caracterización de agregados y su relación con la inmunogenicidadnorma argentina

Edición y vigencia de la norma

Farmacopeas de referencia en sus ediciones vigentes; guías internacionales armonizadas sobre productos biotecnológicos vigentes

Volumen de muestra

Destructivo. De 0,5 a 5 mL de producto según las técnicas empleadas

Conservación y transporte

La muestra se manipula con cuidado extremo porque el propio manejo genera agregados: no se agita, no se hace espuma, no se pipetea con fuerza y no se congela y descongela salvo que sea parte del diseño; cada ciclo se registra. Se guarda a la temperatura declarada y se lleva a temperatura de ensayo de manera suave. El material debe estar libre de partículas y no se usan filtros salvo que estén validados para el producto, ya que retienen agregados y esconden justamente lo que se busca. Se corre un control de referencia del propio producto en cada serie para verificar que el sistema no esté generando o perdiendo agregados.

Límite de detección típico

La exclusión molecular resuelve especies desde el 0,05 % del área; el conteo de partículas detecta desde 1 a 2 µm

Incertidumbre típica

Del orden del 5 al 10 % relativo en los porcentajes de especies y del 20 al 30 % en el conteo de partículas subvisibles

Área

Farmacéutico; Biología molecular

Fecha de última actualización: 1/10/2026

Ficha N.º 3828 · ¿Ves algo para corregir? Escribinos