Cromatografía en capa delgada para identificación y límite de impurezas según farmacopea

Fundamento

Sobre una placa recubierta de una capa fina de adsorbente, en general gel de sílice con indicador de fluorescencia, se siembran volúmenes exactos de la solución de la muestra, de la solución del patrón de referencia y de soluciones de comparación preparadas por dilución de la muestra a la concentración que representa el límite de impurezas. La placa se desarrolla en una cuba saturada con la fase móvil que indica la monografía, dejando que ascienda por capilaridad hasta la marca; la separación depende del reparto de cada compuesto entre el adsorbente y el solvente. Terminado el desarrollo se seca la placa y se revela: por observación bajo luz ultravioleta de onda corta, donde los compuestos que absorben apagan la fluorescencia del indicador y aparecen como manchas oscuras; bajo onda larga para los que fluorescen; o por pulverización con un reactivo que da color con el grupo funcional buscado, seguida o no de calentamiento. La identificación se establece porque la mancha principal de la muestra coincide en posición, tamaño e intensidad con la del patrón. El límite de impurezas se evalúa comparando cada mancha secundaria de la muestra con la mancha de la solución de comparación: ninguna puede ser más intensa que la que representa el límite. La versión de alto rendimiento, con placas de partícula más fina, siembra automática y lectura por densitometría, convierte el método en cuantitativo.

Analito (qué se mide)

Identidad de la sustancia por comparación de posición y aspecto de las manchas, y límite de impurezas relacionadas

Matriz (en qué muestra)

Principios activos y excipientes; drogas vegetales y extractos; preparaciones magistrales; productos importados; materias primas de proveedores nuevos

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Cubas de desarrollo con tapa; sembrador manual o automático; lámpara ultravioleta de doble longitud de onda; estufa; pulverizador de reactivos en campana; densitómetro para la variante cuantitativa; balanza analítica.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Placas de gel de sílice con indicador de fluorescencia; solventes de calidad cromatográfica para la fase móvil; patrones de referencia farmacopeicos; reactivos de revelado específicos; nitrógeno para secado.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Capilares o jeringas de siembra; reglas y lápiz blando; pinzas; frascos para las soluciones; campana de pulverización.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Placas; solventes; patrones; guantes; capilares.

Unidad

1 · factor de retención de cada mancha · identidad conforme o no conforme · intensidad de las manchas secundarias frente a la solución de comparación (%) · resolución entre manchas críticas

Rango de referencia

El límite de cada impureza individual se establece por la solución de comparación que indica la monografía, en general entre 0,1 y 1 % respecto de la sustancia; la identificación exige coincidencia de posición y aspecto con el patrón

Norma que lo exige

La Farmacopea Argentina, en las monografías que establecen la identificación por cromatografía en capa delgada y el ensayo de sustancias relacionadas por esa técnica; las buenas prácticas de fabricación y de elaboración de preparaciones magistrales; las disposiciones de la autoridad regulatoria sobre control de materias primasnorma argentina

Norma que describe la técnica

La Farmacopea Argentina en su capítulo de métodos cromatográficos, cromatografía en capa delgada, con sus condiciones de placa, siembra, desarrollo y revelado; los capítulos equivalentes de las farmacopeas de referencia; las normas de cromatografía en capa delgada de alto rendimiento para la variante instrumentalnorma argentina

Edición y vigencia de la norma

Farmacopea Argentina en su edición vigente; farmacopeas de referencia en sus ediciones vigentes

Volumen de muestra

Destructivo. Unos pocos miligramos de muestra por siembra

Conservación y transporte

Las placas se guardan en ambiente seco y se activan en estufa cuando la monografía lo indica, ya que la humedad del adsorbente cambia los factores de retención y las manchas se corren respecto del patrón. La cuba se satura con la fase móvil el tiempo indicado, con papel de filtro en la pared, porque una cuba no saturada da desarrollos irregulares y bordes deformados. La siembra se hace en manchas chicas y bien secas entre aplicaciones. La placa no se toca con los dedos: la grasa de la piel deja manchas propias. El revelado se hace en campana y la observación bajo ultravioleta con protección ocular.

Límite de detección típico

Resuelve impurezas presentes desde el orden del 0,05 al 0,1 % respecto de la sustancia principal, según el revelado

Incertidumbre típica

El resultado es comparativo y categórico; la variante densitométrica alcanza del orden del 5 al 10 % relativo

Área

Farmacéutico; Química analítica

Fecha de última actualización: 10/9/2026