Cuantificación por espectrofotometría UV (A260/A280)

Fundamento

Los ácidos nucleicos absorben al máximo a 260 nm; la absorbancia se convierte a concentración con el coeficiente de extinción. Las relaciones A260/A280 y A260/A230 indican contaminación con proteínas y con sales o fenol respectivamente.

Analito (qué se mide)

ADN o ARN

Matriz (en qué muestra)

Extracto purificado

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Espectrofotómetro de microvolumen (tipo NanoDrop) o con cubeta de cuarzo.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Buffer de elución como blanco; agua libre de nucleasas.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Cubetas de cuarzo o pedestal de microvolumen; micropipetas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Papel libre de pelusa; puntas.

Unidad

ng/µL · A260/A280 · A260/A230

Rango de referencia

ADN puro: A260/A280 ≈ 1,8 · ARN puro: ≈ 2,0

Edición y vigencia de la norma

Esta técnica no responde a una norma única: se aplica con procedimientos internos validados por cada laboratorio, o forma parte de un método más amplio que sí tiene norma. Si el resultado va a usarse con fines regulatorios o legales, hay que acordar de antemano el procedimiento y su validación.

Volumen de muestra

1 a 2 µL de extracto

Conservación y transporte

El extracto va en buffer TE o agua libre de nucleasas, a −20 °C. Se mide en el momento sobre una gota: la muestra se recupera después.

Límite de detección típico

2 ng/µL de ADN doble cadena

Incertidumbre típica

±5 a 10%; los contaminantes que absorben a 260 nm inflan el resultado

Área

Biología molecular

Fecha de última actualización: 3/9/2026