RT-qPCR (transcripción reversa acoplada a PCR en tiempo real)

Fundamento

Una transcriptasa reversa convierte el ARN en ADN complementario y, en el mismo tubo o en un paso siguiente, ese cDNA se amplifica y cuantifica por PCR en tiempo real.

Analito (qué se busca)

ARN viral; Transcriptos

Matriz (en qué muestra)

ARN extraído

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Termociclador de tiempo real; cabina de PCR; microcentrífuga refrigerada.

Proveedores de Biología molecular.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Master mix de un paso con transcriptasa reversa y polimerasa; cebadores y sondas; control de gen de referencia; inhibidor de ARNasas.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Placas ópticas; gradillas frías.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Puntas con filtro; placas.

Proveedores de Micropipetas y puntas.

Unidad

copias/mL · Ct · expresión relativa (2^-ΔΔCt)

Rango de referencia

Según ensayo validado

Norma que lo exige

ISO 15189, que fija los requisitos de calidad y competencia de los laboratorios clínicos y es el marco bajo el cual se realiza esta determinación. La norma no describe el método: cada laboratorio lo valida según el equipo y el reactivo que usa, y sigue las instrucciones de uso del fabricante.norma internacional

Edición y vigencia de la norma

Esta técnica no responde a una norma única: se aplica con procedimientos internos validados por cada laboratorio, o forma parte de un método más amplio que sí tiene norma. Si el resultado va a usarse con fines regulatorios o legales, hay que acordar de antemano el procedimiento y su validación.

Volumen de muestra

10 a 100 ng de ARN por reacción

Conservación y transporte

Tubo con el ARN en agua libre de nucleasas, congelado a −70 °C. El ARN se degrada en minutos a temperatura ambiente: todo el manejo va en frío y con material libre de RNasas.

Límite de detección típico

10 copias por reacción

Incertidumbre típica

±20 a 30%: la transcripción reversa suma su propia variabilidad

Área

Biología molecular; Clínico/bioquímico

Fecha de última actualización: 3/9/2026

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