Extracción de ARN con tiocianato de guanidinio-fenol

Fundamento

El tiocianato de guanidinio lisa las células e inactiva las ARNasas; al agregar cloroformo se separan tres fases y el ARN queda en la fase acuosa superior, de donde se precipita con isopropanol.

Matriz (en qué muestra)

Tejido / cultivo celular

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Centrífuga refrigerada a 4 °C; campana de gases; termobloque; espectrofotómetro.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Reactivo de tiocianato de guanidinio-fenol; cloroformo; isopropanol; etanol 75% en agua libre de nucleasas; ADNasa I.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Tubos libres de ARNasas; micropipetas dedicadas.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Puntas con filtro; guantes; agua libre de nucleasas.

Unidad

ng/µL · RIN (número de integridad del ARN)

Rango de referencia

RIN ≥7 para expresión génica

Edición y vigencia de la norma

Esta técnica no responde a una norma única: se aplica con procedimientos internos validados por cada laboratorio, o forma parte de un método más amplio que sí tiene norma. Si el resultado va a usarse con fines regulatorios o legales, hay que acordar de antemano el procedimiento y su validación.

Volumen de muestra

10 a 100 mg de tejido, o 10⁶ a 10⁷ células

Conservación y transporte

Congelar a −70 °C apenas se toma, o sumergir en RNAlater. Todo el manejo con material libre de RNasas. El ARN se degrada en minutos a temperatura ambiente: es la muestra más frágil de todo el catálogo.

Límite de detección típico

10 ng de ARN por microlitro

Incertidumbre típica

Se controla con el número de integridad de ARN (RIN); por debajo de 7 el resultado se resiente

Área

Biología molecular

Fecha de última actualización: 3/9/2026