Detección de micoplasmas y de virus adventicios en sustratos celulares y en productos biológicos

Fundamento

La detección de micoplasmas se hace por dos vías que la farmacopea exige en paralelo. El método de cultivo siembra la muestra en medios líquidos y en agar específicos y los incuba en aerobiosis y en anaerobiosis durante períodos largos, observando el desarrollo de las colonias características en forma de huevo frito; es sensible pero tarda semanas. El método de cultivo celular indicador siembra la muestra sobre una línea celular sensible y revela los micoplasmas por tinción fluorescente del ADN, que aparece como puntos en el citoplasma y alrededor de las células. La reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real detecta el ADN de las especies relevantes en horas y está aceptada como alternativa una vez validada frente a los métodos de referencia. Los virus adventicios se buscan con una estrategia en capas: ensayos in vitro que inoculan la muestra en varias líneas celulares de distinto origen y observan el efecto citopático y la hemadsorción; ensayos in vivo en animales y en huevos embrionados cuando la monografía los exige; ensayos específicos por reacción en cadena de la polimerasa para los virus de riesgo conocido según la especie de origen; retrotranscriptasa para detectar retrovirus; y microscopía electrónica de transmisión sobre el sedimento celular, que ve partículas virales sin saber de antemano cuáles buscar. La secuenciación masiva sin sesgo se está incorporando como método integral capaz de detectar cualquier agente cuyo genoma esté en las bases de datos.

Matriz (en qué muestra)

Bancos de células maestro y de trabajo; cosechas no procesadas de producción; sustratos celulares y materias primas de origen animal; sueros y tripsinas; productos de terapia celular; lotes semilla virales

Equipamiento necesario¿Dónde lo compro?

Incubadoras de cultivo celular y estufas de anaerobiosis; cabinas de bioseguridad de nivel adecuado; microscopio de fluorescencia y microscopio invertido; termociclador en tiempo real; microscopio electrónico de transmisión; equipo de secuenciación masiva o acceso a servicio; centrífuga refrigerada.

Reactivos¿Dónde lo compro?

Medios de cultivo específicos para micoplasmas; líneas celulares indicadoras; colorantes fluorescentes de ADN; juegos de amplificación con controles; cepas de referencia de micoplasmas; reactivos de microscopía electrónica; juegos de secuenciación.

Material de laboratorio¿Dónde lo compro?

Placas y frascos de cultivo; portaobjetos; tubos de reacción; grillas de microscopía electrónica; criotubos; puntas con filtro.

Consumibles¿Dónde lo compro?

Medios y reactivos; placas y puntas; guantes; grillas; reactivos de secuenciación.

Unidad

1 · resultado de micoplasmas por cultivo y por método indicador · resultado por amplificación con su límite · agentes virales buscados y su resultado · partículas observadas por microscopía electrónica

Rango de referencia

El criterio es de ausencia: cualquier detección de micoplasma o de virus adventicio invalida el banco o la cosecha; los métodos alternativos deben demostrar una sensibilidad equivalente a la de los de referencia, del orden de 10 unidades formadoras de colonias por mililitro

Norma que lo exige

La Farmacopea Argentina, en sus capítulos de ensayo de micoplasmas y de agentes adventicios en productos biológicos; las disposiciones de la autoridad regulatoria sobre productos biológicos y sobre bancos celulares; las guías internacionales armonizadas sobre derivación y caracterización de sustratos celulares y sobre evaluación de la seguridad viral; las recomendaciones de la Organización Mundial de la Saludnorma argentina

Norma que describe la técnica

La Farmacopea Argentina y las farmacopeas de referencia en sus capítulos de ensayo de micoplasmas, de agentes extraños y de seguridad viral de productos biológicos; las guías internacionales armonizadas sobre sustratos celulares y sobre validación de la eliminación viral; las recomendaciones de la Organización Mundial de la Salud sobre bancos celularesnorma argentina

Edición y vigencia de la norma

Farmacopea Argentina y farmacopeas de referencia en sus ediciones vigentes; guías internacionales armonizadas vigentes

Volumen de muestra

Destructivo. Se necesitan volúmenes definidos de cosecha o alícuotas del banco celular, que son recursos escasos y se planifican

Conservación y transporte

Las muestras se toman sin antibióticos en el medio o con su neutralización previa, porque los antibióticos enmascaran los micoplasmas y son la causa clásica de un resultado negativo falso; ese detalle está en la monografía y se cumple. Se guardan congeladas si no se procesan de inmediato, aunque el método de cultivo prefiere muestra fresca. El trabajo se hace en instalaciones con separación física entre las áreas de cultivo de producción y las de ensayo, para no introducir el contaminante que se está buscando. Se corren controles positivos con cepas de referencia en cada serie, en área separada.

Límite de detección típico

Del orden de 10 a 100 unidades formadoras de colonias por mililitro para micoplasmas; los métodos moleculares detectan unas pocas copias de genoma

Incertidumbre típica

Los resultados son categóricos; su validez depende de los controles de sensibilidad y de inhibición, que se documentan

Área

Farmacéutico; Microbiología

Fecha de última actualización: 10/9/2026